衣原体病病原的分离与鉴定_李树根VIP专享VIP免费

衣原体病病原的分离与鉴定李树根综述刘福安审校衣原体病(Chlamydiosis)为鹦鹉衣原体(ehza。;yd玄aps云才亡ae￡)引起的禽类、哺乳类、节足类及其他动物的疾病的统称。《鹦鹉热》由M6ra-n群氏于1895首先倡用的。后来发现其他非鹦鹉科禽类(包括家禽和野禽)一也能感染本病,遥Meye:氏(1941)遂提出《鸟疫》(Ornithosis)这个名词。现已知鹦鹉热和鸟疫只有流行病学方面的差异,并没有本质上的区别,近些年来,统称为《衣原体病》。衣原体可引起鹦鹉、鸽、鸡和其它禽类的隐性或慢性感染。鸽子隐性感染较多,因地区不同可达2Q~50%。在美国的火鸡群、在欧洲鸭群中传染性最大。迄今已发现10种以上的不同鸟类受到自然感染。此病广泛分布于五大洲。现将国外关于衣原体病的禽病原体分离与鉴定方法概述如下。衣原体的分离(一)病料的采取和保存1.急性传染的病料采集:急性的、严重感染的衣原体病动物,在剖检时,可采集病变器官的分泌物或有充血的组织、充血的肺组织、有病变的脾和肝的组织块、增厚的有分泌物被复的气囊膜或分泌液、充血部位的肠粘膜或结肠的内容物、结膜或鼻的分泌物,活体病料可采集结膜刮落物,用棉试子沽取气管和鼻分泌物,在发热期取全血并用肝素作抗凝处理,及采取粪便。2.隐性或亚临床感染的病料采集:温和病例或亚临床感染的禽进行尸体剖检时,应采集这些禽的肝、脾、肾和结肠内容物等病料作病原的分离。呈隐性感染的禽脾或肝可能会肿大,或气囊增厚。肠道的亚临感染床是常见的,其病原体可以从新鲜的粪便中分离到(Page,1980)3.病料标本的保存:采集的标本必须避免接触对衣原体或细胞有害的物质(甘油对衣原体有灭活的作用)。常用的保存液为蔗糖、磷酸盐、谷氨酸盐培养液。另外,任何组织培养的维持液如3~10%小牛血清、培养肉汤、脱脂奶等,加入抗菌素(链霉素50一100微克/毫升,万古霉素50一10微克Z毫升,弗来霉素30微克/毫升)都可以用来保存标本。在一20℃或更低的温度下,组织标本中的衣原体可长期维持其括力,保存的温度不要在。一一2〔,℃之间反复波动。在严重感染的组织内,衣原休可在4℃中保持活力动天。但在这期间.传染的效价二引斩地下降到零(Page,1980)(二)分离方法1.病料标本的处理:爪无菌操旅采茱的标本加六到营养肉汤或PES(PH了.2)中研磨戊20~40%怒液,4℃放置4小时,取上清掖接种‘污染的标本,每毫升可加入链霉素、万古霉素、卡那霉素1毫克,或庆大霉素。.1一。.5毫克处理2小时。如采集的标本严重污染时,必须在匀浆液中加入链霉素(10毫克/毫升)和新霉素(1毫克/毫升)或链霉素(5毫克/毫升),短湘素(。.。2毫克厂毫升)和磺胺嚓咤(2毫克/毫升)或杆菌肤(1000单位/毫升)(Sehaeht。r等,1978)。液体的标本如肝素处理血液和无菌操作采集的腹水,可直接接种实验动物分离衣原体。粪便和细菌污染严重的组织标本,悬浮在20%的链霉素、万古霉素和卡那雷素溶液中,1000转‘分钟离心三次,每次30分钟。每次离心后,提取上清液的中间部分作为下次离心液,而其它任何漂动的材料或沉淀物废弃。第三次离心后,提取中间层溶液作为接种用(Storz,1971)。所有磨碎和匀浆化的操作穆序必须是无菌的,在安全罩下操作目的是防止细菌污染和消除气溶胶感染操作人员的危险。2。首选的实脸动物和培养物:实验动物可用鸡胚、小鼠和豚鼠、更普遍采用的是传代细胞系培养物,特别是MeC6y细胞(SchaChter等1978)。3。小白鼠、豚鼠的接种:取处理过的标本。。5毫升,接种于三周龄小白鼠腹腔中(也可同时接种0.伪毫升于脑内),每份标本接种6一6只,观察21天。所有的衣原休各毒株都能在实验小白鼠中分离繁殖,感染衣原体的小日鼠在5~15天内死亡。毒性强的衣原体将会产生严重的全身性感染,5一7夭后可能发生死亡。剖检可见器官充血,「特别是肺部,脾和肝肿胀,以及在腹膜和胸腔有粘稠的渗出物。一层纤维蛋白膜可能复盖和围绕肝和脾,具有特征性的是所有渗出物都含有大量的单核细胞,其中许多细胞的胞浆内有衣原体存在(Page,198。)。如果致病力较弱的衣原体,小白鼠不一定死亡。但是,衣原体可在腹膜的细胞内增殖和生长而损坏血管的内皮,并从腹膜的毛细血管中渗出浆液,在一只六周龄的小白鼠腹腔内这种液体可增加到加毫升,因而,引起幼鼠肿胀而不能活动。这些液体...