毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素木犀草素山萘酚VIP专享VIP免费

毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙荆瑞俊31,2姜小莹1,2侯书荣2李向军2袁倬斌21(河南科技学院化学化工学院,新乡453003)2(中国科学院研究生院化学与化学工程学院,北京100049)摘要采用毛细管区带电泳紫外检测法(CZE2UV)同时测定中药莲须中槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙4种有效成分。研究了缓冲溶液的离子浓度、pH值和电压对分离度和迁移时间的影响,得到了最佳分离实验条件。在离子浓度为40mmol/LNa2B4O7缓冲溶液(pH9.0)中,分离电压为16kV,波长为254nm时,槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙4种物质在10min内得到了良好的分离测定,其检出限分别为5.0、6.7、4.5和6.0mg/L。本方法应用于实际样品的测定,结果令人满意。关键词莲须,槲皮素,木犀草素,山萘酚,异槲皮甙,毛细管电泳2006209220收稿;2007203207接受本文系国家自然科学基金(No.20175025,29875027)、国家自然科学基金分析化学重点基金(No.20235010)资助项目3E2mail:jrjhn1025@hist.edu.cn1引言高效毛细管电泳以高压直流电场为驱动力,以毛细管作分离通道,依据样品之间电离度和分配行为上的差异而实现分离,具有高效、快速、样品用量少等优点,与传统的高效液相色谱分析法相比,它进样体积小(1～50μL)[1,2]、用时短,而且不会污染柱。在中药有效成分分析中已得到了广泛应用。莲须为睡莲科植物莲的干燥雄蕊,用于治疗遗精滑精、带下和尿频。莲须、荷叶、莲子心和莲子均为莲的不同药用部位。化学成分和含量测定方法集中在莲子上,对莲须中的有效成分分析还不多见,孟宪生[3]等使用高效液相色谱分析了莲须中的槲皮素和山萘酚。王月伶等[4]采用离子液体修饰毛细管胶束电动色谱法测定了槲皮素和异槲皮甙。本实验采用毛细管电泳紫外检测同时分离测定了莲须中的槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚。在优化的实验条件下,上述4种组分能被完全分离测定。本实验方法简便、快速,为莲须的质量分析提供了新的指标性成分的分析方法。2实验部分2.1仪器与试剂CL1020高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司、中科院研究生院应化所),检测波长范围为190～700nm;未涂层弹性石英毛细管柱(50μmi.d,总长50cm,有效长度40cm,(河北永年光导纤维厂),pHS23B酸度计(上海雷磁仪器厂),H6605型超声清洗机(无锡电子设备厂)。标准对照品:槲皮素、木犀草素、异槲皮甙、山萘酚(Sigma公司)、莲须(北京同仁堂药店),其它试剂均为分析纯。实验用水为三次蒸馏水。1.0g/L标准溶液的制备:准确称取槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚对照品,分别用乙醇溶解,以0.45μm醋酸纤维滤膜过滤后备用。2.2实验方法以40mmol/LNa2B407(NaOH调节至pH9.0)缓冲溶液为电泳介质。未涂层弹性石英毛细管(50μmi.d,总长50cm,有效长度为40cm)。所有溶液使用前均用0.45μm滤膜过滤。毛细管使用前用0.1mol/LNaOH、水、电泳缓冲溶液各冲洗10min,然后在每次电泳后分别用0.1mol/LNaOH、水、缓冲溶液冲洗5、5和2min,可保持迁移时间和峰高良好的重现性,然后进行分离测定。采用重力进样,进样高度10cm,进样时间6s,分离电压16kV,检测波长254nm。所有实验均在室温下进行。第35卷2007年8月分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报ChineseJournalofAnalyticalChemistry第8期1187～11902.3样品溶液的制备莲须样品粉碎,过筛(20μm)后,准确称取4.6101g,加人50mL乙醇,水浴加热回流4h,趁热过滤,滤液蒸发至15mL,然后再稀释定容至50mL,样品溶液以0.45μm滤膜过滤后备用。3结果与讨论3.1缓冲溶液pH及其浓度的影响本方法分别以Na2B4O7溶液、Na2HPO42NaH2PO4混合溶液和Na2HPO42Na2B4O7混合溶液、NaH2PO42Na2B4O7混合溶液为缓冲溶液进行电泳分析实验,结果发现,以Na2B4O7溶液作为电泳缓冲溶液分离效果最好。缓冲溶液的pH值是影响组分分离的主要因素,它可以影响Zeta电势(ζ)、电渗流(FOF)和分析物的带电情况,进而影响分析物的迁移时间[5～7]。在实验过程中得知,随着pH值的增大,迁移时间延长,但增大程度不同,图1pH值对4种物质迁移时间和出峰顺序的电泳图Fig.1EffectofbufferpHonthemigrationtimeandorderofapex1.异槲皮甙(isoquercitrin);2.山萘酚(kaempferol);3.木犀草素(luteolin);4.槲皮素(querc...