应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本VIP免费

沈阳隈学院学报journalofShenyangMedical．CoHege第6卷第1·技术与方法·期2004年3月应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本杨慧(沈阳医学院图书馆．辽jj沈阳110034)【关键词】目的：探讨spurr树脂包埋荆是否适合制备血样电镜样品。方法：多决离心技术制备血样．并对原始的Spun"配方进行盘良，改变增塑剂乙二醇二甘油醚的量，调节包埋块的硬度，使其适合制备体液样品的电镜超薄切片，结果：超薄切片上红、白细胞排列紧密，每个视野可见多十细胞、与常规的Epoll树脂包埋剂相比，明显增加了可供观察的信息量。细胞的蛄构清晰，未见明显的聚合损伤以噩人工假象等。结论：Spurr树脂包埋荆是制备血样电镜标本的良好包埋荆。【关键词】spu仃树脂；包埋荆；透射电镜【中周分类号】R329—33；318．08【文献标识码】A【文章编号】1008—2344(2004)OI一0035—02ApplicationofSpurrResinEmbeddingMediumwithMulti—centrifugationforMakingtheElectronMicroscopicSpecimenofBloodYANCHuimboratotyofShenyangMMi'calCollege，Shcnyang】10034，China【Abstract】Objective：ToexplorewhetherSpurtresinembeddingmeddiumissuitableformakingtheelectronmi—c110seopic8pecimenofbloodMethods：Multi·eentrifogationwanusedforpreparingbloodspecimen，andtheoriginalSpurtprescriptionwasmodified．ThesolidityofembeddingspecimenWagadjusted，inordertomakeitsuitableforpreparingul—trat]1insections0fblood．bychangingthevolumeofDER736Re*IIIts：Ontheuhrathinsection，t上leredandwhitebloodcellswerecl。setogether．andmanyeenscouldbeseenineachfieldofvisionComparedwiththeordinaryEponresinem—beddingmedium，theobservinginformationWaSincreasedobviouslyinSpurrmedium．Inaddition，thecellularstraeturew*cleararidfroembeddingdamageandartificialpsudophenomenonwerefoundinSpulTembeddedspechnen．Condu。sion：SDuⅡresinis8goodembeddingmediumformakingthedectmnmicroscopicspecimenofblood．IKeywords】Spun"resin；embeddingmedium；transmissiondectmnmieroseopespurr树脂包埋剂是一种环氧树脂包埋剂”。。。由于这种包埋剂具有粘度低、易浸透的特点，被广泛应用于制备植物根、茎、果实的透射电镜超薄切片领域。在制备体液如血液和精液等电镜切片的实际科研工作中，我们发现常规的Epon包埋剂粘度大，样品在Epon包埋剂内离心效果差导致细胞排列松散，不利于在电镜下观察。因此，我们尝试应用spurr树脂制备血液的电镜样品，利用其低粘度的特点，可制备出细胞排列密集的体液电镜超薄切片。1材料与方法1．1spu”树脂包埋剂【收稿日期】2003—12—161．1，lspurr包埋剂由以下四种成分构成①二氧环己烷(ERL-4206)：为包埋剂中的主要树脂成分。末端的两个环氧基在聚合时能打开并互相形成网状交织结构；②乙二醇二甘油醚(DER736)：为增塑荆，能使包埋块的硬度不至于过大并具有一定韧性，利于用超薄切片机制备超薄切片；③琥珀酸酐(NSA)：为硬化剂。其分子中的酸酐可与羟基结合，在分子之间形成横桥，从而保证包埋块的硬度；④二甲胺基乙醇(S-1)：为催化剂。能加速打开二氧环己烷树脂的两个环氧基，加快聚合反应。1．1．2Spurr包埋剂配方对spurr等人推荐的原始配方进行改良o’。通过改变增塑剂乙=醇二甘油醚的量，调节包埋块的硬度，使其适合制备体液样万方数据沈阳医学院学报品的电镜超薄切片。配方为：二氧环已烷(ERI，．4206)25g、乙_二醇二甘油醚(DER736)2．0g、琥珀酸酐(NSA)6．5g、二甲胺基乙醇(S-1)015g。四组份混台在一个清洁的烧杯内并搅拌均匀待用。12超簿切片制备I2．1血样血液样品取自5名临床体检健康男性。由¨盯素抗凝{Ill，4℃冰箱内保存。按常规方法用离心机离心血样，分别取白细胞和红细胞置于离心管内。12．2吲定向含有白细胞和红细胞的离心管内加入25％的戊二醛液，轻轻吹打后离心。轻取戊：醛液，加人磷酸缓冲液(PBS)，并吹打离心漂洗3次，每次5min。吸出PBS加入1％锇酸，吹打离心后固定20rain。PBS漂洗3次，每次5rain。I．2．3脱水按常...