实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析一、实验目的二、实验原理三、材料与试剂四、操作步骤五、思考题一、实验目的•掌握叶绿体色素的提取方法；•掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；•掌握叶绿体色素的部分理化性质。二、实验原理（一）叶绿体色素：1.叶绿素2.类胡萝卜素叶绿素a叶绿素b胡萝卜素叶黄素3:1(阳生)２:1(阴生)2：13：1•均为亲脂性>亲水性，均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。•极性大小：叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素。∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：叶绿素b<叶绿素a<叶黄素<胡萝卜素。叶绿素a、b的结构式类胡萝卜素的结构式叶绿素的吸收光谱类胡萝卜素的吸收光谱叶绿素的荧光现象•荧光现象：叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。荧光现象的原理反射光能量<入射光∴波长>入射光三、材料与试剂•新鲜的植物叶片。•95%乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸。•新华滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。四、操作步骤1、叶绿体色素提取：叶片洗净，吸干，去中脉后取2g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，研钵中加2～3ml95％乙醇，研磨至糊状，再加10～15ml95％乙醇，提取3～5min。过滤，滤液即为色素提取液。123452、叶绿素提取液荧光现象观察•取叶绿体色素提取液少许于试管中；•从与入射光垂直的方向观察；•再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色；•记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同，分析原因。3、铜代叶绿素反应•向叶绿素溶液中逐滴加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化，观察并记录现象；•向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜，并在酒精灯上缓缓加热，观察并记录颜色的变化。并分析原因。4、叶绿体色素的分离——（纸层析法）•惰性支持物：滤纸；•固定相：水；•流动相：石油醚：丙酮：苯（v：v=10:2:1）推进剂层析动画1）准备•卷纸芯：取一张滤纸条（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液沿纸条的长度方向涂在纸条的一边，使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次，然后沿长度方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。•取一张圆形大滤纸，中心穿孔，将纸芯插入，一端与纸面平齐；纸芯插入小培养皿（内加少量推进剂），点样端朝上，加盖，展层；2）层析•层析至前沿接近纸边缘。•风干立即用铅笔标出各层与位置。成分1成分2成分3成分4•标明各层成分名称和判断依据。五、思考题：1．研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？2．画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解释原因。3．荧光现象的原理是什么？
