DNA重组技术的基本工VIP免费

基因工程的概念基因工程的概念基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程的别名基因工程的别名操作环境操作环境操作对象操作对象操作水平操作水平基本过程基本过程实质实质结果结果((目的）目的）基因拼接技术或基因拼接技术或DNADNA重组技重组技术术生物体外生物体外基因基因DNADNA分子水平分子水平人类需要的基因产物人类需要的基因产物剪切剪切→→拼接拼接→→导入导入→→表达表达基因重组基因重组基因工程的概念基因工程的概念DNA重组技术的基本工具本节知识内容§1.1DNA重组技术的基本工具专题一基因工程“分子手术刀”──限制酶“分子缝合针”──DNA连接酶“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体识别双链识别双链DNADNA分子的某种分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中，并且使每一条链中特定部位特定部位的两个核苷酸之间的的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。断开。主要是从主要是从原核生物中分离纯化出来原核生物中分离纯化出来的一的一种酶。能将外来的种酶。能将外来的DNADNA切断切断，由于这，由于这种切割作用是在种切割作用是在DNADNA分子内部进行的，分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。故名限制性核酸内切酶。40004000种。种。11、来源：、来源：22、种类：、种类：33、作用：、作用：44、结果：、结果：形成两种末端形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶粘性末端平末端•什么叫黏性末端？什么叫黏性末端？当限制酶在它识别序列的当限制酶在它识别序列的中心轴线中心轴线两侧两侧将将DNADNA的两条链分别切开时，产生的两条链分别切开时，产生的是黏性末端。的是黏性末端。被限制酶切开的被限制酶切开的DNADNA两条单链的切两条单链的切口，带有几个口，带有几个伸出的核苷酸伸出的核苷酸，他们之间正，他们之间正好好互补配对互补配对，这样的切口叫，这样的切口叫黏性末端黏性末端。。什么叫平末端？什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的切开时，切开的DNADNA两条单链的切口，两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫是平整的，这样的切口叫平末端平末端。。二、“分子缝合针”——二、“分子缝合针”——DNADNA连接酶连接酶1、种类：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源：大肠杆菌作用：使黏性末端之间连接来源：T4噬菌体作用：既能连接黏性末端也能连接平末端，但连接平末端之间的效率比较低2、作用部位：磷酸二酯键DNADNA连接酶连接酶可把黏性末端可把黏性末端之间的缝隙之间的缝隙““缝合缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的接起来，这样一个重组的DNADNA分子就形成分子就形成了。了。DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶是一回事吗？为什么？聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键是否需要模板不需要模板需要模板DNA连接酶与DNA聚合酶的比较：三、三、基因的载体——“分子运输车”载体必须具备的条件：1、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；2、能够在自主复制，或整合到染色体DN上随染色体DNA进行复制；3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）4、对受体细胞无害5、大小适中，便于操作载体的作用：1、将外源基因转移到受体细胞中去。2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。常用的载体有：质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。质粒质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。1.2基因工程的基本操作程...