电脑桌面
添加小米粒文库到电脑桌面
安装后可以在桌面快捷访问

TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成VIP免费

TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成_第1页
1/10
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成_第2页
2/10
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成_第3页
3/10
TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabeling)法实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)TUNELTUNEL的原理TUNEL的操作步骤结果及注意事项主要试剂1.缓冲液(LabelingBuffer):用于维持一定的反应条件,含有以下成分:500mmol/L二甲胂酸钾、pH7.210mmol/LCoCl2(氯化钴)、1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)。2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT):催化3’-OH末端dUTP反应的关键酶3.荧光素-dUTP:TdT的底物和本实验的标记物4.蛋白酶K:消化组织,增加细胞通透性TUNEL的原理凋亡细胞的特征是:内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质DNA被切割,出现单链或双链缺口,并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(TerminaldeoxynucleotidylTransferaseTdT)能将脱氧核糖核苷酸连接到DNA的3’-末端。TUNEL的原理是:用荧光素(fluorescein)标记的脱氧核糖核苷酸,在TdT的作用下连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,用荧光显微镜即可观察结果。在此基础上连接辣根过氧化酶标记的荧光素抗体,可进一步放大检测信号,并且普通显微镜观察实验结果。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3’-OH形成,很少能够被染色。TUNEL原理标本处理实验步骤实验流程结果注意事项•极少数细胞凋亡时没有DNA断裂或DNA裂解不完全,此时不适用TUNEL法检测,进而产生假阴性结果。•在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA片断,•从而引起假阳性结果。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标

1、当您付费下载文档后,您只拥有了使用权限,并不意味着购买了版权,文档只能用于自身使用,不得用于其他商业用途(如 [转卖]进行直接盈利或[编辑后售卖]进行间接盈利)。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。
3、如文档内容存在违规,或者侵犯商业秘密、侵犯著作权等,请点击“违规举报”。

碎片内容

TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成

确认删除?
VIP
微信客服
  • 扫码咨询
会员Q群
  • 会员专属群点击这里加入QQ群
客服邮箱
回到顶部