君白菊组织培养研讨君白菊具有疏散风热、平肝明目、清咽润喉、护肝正气等药用价值,还是唯一不需使用任何农药的高品质饮用菊花茶,含有人体保健最需要的17种氨基酸和8种矿物质,无论在营养、口感还是在保健方面都超过了传统茶菊,它的胎菊中维生素e含量高出一普通饮用菊花数倍,拥有很好的抗衰老功效。君白菊也是重要的林下经济栽植品种君白菊在种植上具有抗寒、抗旱、抗病虫害等特点,对环境条件要求不高,可以充分利用林下空地进行合理栽植,既构建形成了稳定的生态系统、增加了生物多样性,又为农民创造了客观的经济收人,实现了资源共享、经济共赢的复合经营模式。笔者首次对君白菊微体繁殖和叶片不定芽再生体系进行了研究,建立了以此为基础的两个扩繁体系,为君白菊在经济、生态等方面的综合价值开发和利用奠定了快速繁育的技术基础。1材料与方法1.1实验材料供试材料为盆栽君自菊植株,每月用2%。的naclo消毒液对其进行l次消毒。实验于20XX年12月至20XX年3月进行取材,选取健壮无病虫害的茎,剪取顶端以下3一4个幼嫩的带腋芽的茎段作为实验材料。1.2微体快繁体系的建立1.2.1最佳消毒灭菌体系的建立实验采用酒精和nac10作为灭菌剂。对带芽茎段进行初步灭菌,用75%酒精浸润材料305后,迅速用无菌水冲洗4次,然后再分别用2%、3%、5%、10%的nacio溶液消毒smin,消毒结束后用无菌水冲洗4次。最后,将灭菌后的带芽茎段接种在ms培养基上,每种处理接种外植体10个,实验重复3次。iod后观察统计,根据外植体的污染率、死亡率、成活率等指标筛选出最佳的外植体消毒灭菌体系。成活率=外植体数一污染率一死亡率1.2.2不同植物生长调节剂对增殖的影响实验采用ms作为基本培养基,以细胞分裂素6一节基嘿吟(6一ba)和细胞生长素蔡乙酸(naa)作为植物生长调节剂,共设6种处理(见表第1页共5页l)。将消毒后的带芽茎段置于增殖培养基中,对其进行不定芽诱导,每种处理接种10个外植体,3次重复。培养30d后,统计其增殖系数(接种后死亡茎段不计人其中)。1.2.3不同基本培养基对生根的影响将增殖培养基中诱导出的不定芽进行切割分离,一部分继续留作增殖培养,一部分则切割成约1.5一2.ocm的带芽茎段接种于1/2ms和ms两种基本生根培养基中,每种培养基都各加naalm梦l,每处理接种10个左右的外植体,重复3次。25d后统计生根率。1.2.4不同生长素种类和浓度对生根的影响外植体的切取方法同1.2.3,以1/2ms为基本培养基,每种培养基各加不同浓度的蔡乙酸(naa)和叫噪丁酸(iba),共计6种处理组合(见表2)。每处理接种10个外植体,重复3次。20d后统计生根率(死亡、污染外植体不计人其中)。1.3叶片不定芽再生体系的建立1.3.1不同植物生长调节剂对诱导愈伤组织的影响将微体繁殖中带芽茎段繁殖成功的无菌苗叶片切成0.somx0.scm左右的小块,作为叶片不定芽再生诱导的外植体,以ms作为基本培养基,将其置于添加了不同生长调节剂的培养基中。各种处理组合见表1。每处理6瓶,每瓶4个外植体。20d后统计其愈伤组织诱导率。愈伤组织诱导率=形成愈伤组织的叶片数/接种的叶片数x100%1.3.2不同植物生长调节剂对不定芽分化的影响将养基中进行诱导,其中分化培养基以表1中1一4号6一ba和naa处理组合为依据,每处理6瓶,每瓶4个外植体,20d后统计其分化率和分化系数(褐化,死亡的愈伤组织不计人其内)。分化率二分化的愈伤组织数/接种的愈伤组织数x100%分化系数=分化的不定芽数/分化的愈伤组织数xroo%培养基均添加7留l琼脂,25岁l蔗糖,ph为5.8一6.0,高压灭菌121℃20min,组培室的培养条件为室温(25土2)℃,空气相对湿度60%左右,每个培养架的光照由2根40w的直管型荧光灯管提供,强度为2000~3o00h左右,采用每日光培养16h和暗培养sh的光周期(6:ooam一10:oopm)。ls数据处理数据统计分析采用第2页共5页mierosoftexee一和spss软件处理,多重比较采用lsd检验法。2结果与分析2.1离体快繁体系的建立2.1.1带芽茎段最佳灭菌体系的建立用75%酒精对外植体进行灭菌不仅是对材料的初步消毒,而且酒精还可以浸润外植体的表面,这样就能够使nacio消毒剂更容易均匀地渗透到外植体表面上,杀死细菌和真菌。其中,合适的nacio...