安徽农业大学毕业论文题目：新城疫RT-PCR检测和部分基因序列测定姓名：老男孩学院：动物医学院专业：兽医班级：2009级9班学号：200945026指导教师：++2013年6月8日1目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.1毒株与病料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.2仪器和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.3引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.4新城疫RT-PCR检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.4.1核酸的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.4.2反转录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.4.3扩增NDV部分基因片段⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61.5NDV部分基因片段序列测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61.5.1NDV的增殖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61.5.2NDV部分基因片段扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71.5.3回收纯化RT-PCR产物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71.5.4构建重组表达质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.5.5制备感受态细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.5.6转化连接产物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.1新城疫RT-PCR诊断结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82.2NDV基因片段的RT-PCR扩增结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92.3NDV部分基因片段的测序结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103.0讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114.0结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162新城疫RT-PCR检测和部分基因序列测定兽医专业老男孩指导教师++摘要：应用已经建立的新城疫病毒RT-PCR快速诊断技术，对由德国卡塞蒂非生物工程有限公司提供的疑似新城疫病毒感染的禽病料进行了检测，检测结果为阳性。并对检测结果为阳性的病料进行鸡胚传代，对病毒进行增殖。从鸡胚尿囊液中通过提核酸，反转录，PCR扩增分别扩增出2段基因片段，用1%琼脂糖胶电泳分析RT-PCR产物，构建重组表达载体，转化宿主菌，然后送由姜成康新有限公司进行基因测序。序列分析显示所扩增的目的基因片段长度是2808bp和960bp，序列测定结果已经登陆到GenBank，登陆号为EU546165.2。通过GenBank的Blast比对其与JL-1和LaSota株同源性相近，从部分序列上来看属于ClassIIgenotypeII。关键词：新城疫；RT-PCR；临床诊断；基因测序；3RT-PCRDetectionofNDandPartGeneSequenceAnalysisofNDVStudentMajoringinVeterinarymedicinelaonanhaiTutor++Abstract：TherapiddifferentialdiagnosistechniquefordetectionofNDVwasusedtodetectaclinicalsampleprovidedbytheBioengineeringCompany.Thepositivesamplewasdiagnosedbythegenesequencing.Extractnucleicacidfromthechickembryoallantois.ThroughreversetranscriptionandPCR,twogenesegmentsareamplifiedrespectively.ConducttheelectrophoreticanalysisofRT-PCRoutcomebyusingtheagarosegelof1%.Constructandrecombinetheexpressionvector,transformittothehostbacteriaandthensendtoBiotechnologytoconductthegeneticsequencing.ComparisonofsequencingresultswiththeNCBIdatabasefoundthatthesetwogenefragmentsshowednosignificantvariation.AllthesequencesobtainedfromtheNDVisolatesweresubmittedtoGenBank，theaccessionnumberswereEU546165.2．Th...
