几丁质酶基因的克隆及在伯克氏菌中的表达VIP免费

(中国生物防治， 2006 年, 22（增）：72-77) 芽孢杆菌几丁质酶基因的克隆、序列分析及其在伯克氏菌B418 中的表达黄玉杰1 杨合同12 周红姿1 李纪顺1 吴远征1 扈进冬11 山东省科学院中日友好生物技术研究中心，山东省应用微生物重点实验室，济南250014；2 山东理工大学生命科学学院，淄博255049 摘要采用 PCR 技术扩增到枯草芽孢杆菌几丁质酶基因的编码序列。片段共2227bp，含有一个具有 1788 个核苷酸的开放阅读框架，起始密码子位于211bp，终止密码子位于 1998bp，共编码氨基酸 605 个。序列比较发现同已发表的Bacillus subtilis 几丁质酶核苷酸具有99.39%的同源性。将该基因与大肠杆菌－伯克氏菌穿梭质粒 pRK415 连接，获得重组质粒pRChi113。重组质粒电击转入伯克氏菌B418 中，获得工程菌株B418-9、B418-13。与野生菌株相比，平板拮抗实验表明 ， 工 程 菌 株 对Verticillum dahliae、 Rhizoctonia solani 、 Helminthosporium sativum、Rhizoctonia cerealis抑菌效果明显提高。关键词几丁质酶克隆转化伯克氏菌几丁质酶（ EC3.2.1.14）是催化降解几丁质的一类糖基水解酶，它可将由β-1,4-N-乙酰 -D-葡聚糖（ NAG ）残基组成的几丁质降解为低分子量的NAG[1]。几丁质酶广泛存在于有机物中， 这些有机物本身可能不产生几丁质，例如细菌、 真菌、昆虫、高等植物（ PR 蛋白）和动物等，对防治病原真菌具有重要的作用。顾真荣[2]曾报道三种产几丁质酶的芽孢杆菌（短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌）对病原菌的抑菌作用。本实验室从小麦根际土壤中分离到了具有几丁质酶活性的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis Ap113。通过设计引物获得几丁质酶编码基因，并进行序列分析，并将该基因利用电击方法导入到具有固氮、解磷、解钾，促进植物生长作用伯克氏菌 B418 中，以提高该菌的生防效果， 为生产高产几丁质酶工程菌株奠定基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株与质粒见表 1 表 1 细菌菌株和质粒Table 1 Bacterial strains and plasmids Strains/Plasmids Characteristics Source B.subtilis Ap113 具有几丁质酶活性Store in this lab Burkholderia B418具有解磷、解钾、促进植物生长作用Store in this lab E.coli DH5αEndA1,hsdR17， thi-1,relA1,gyrA,recA1, △80LacZM15，△（ LacZYA-argF） U169 Store in this lab pMD18-T Ampr购自 Takara 作者简...