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实验一细胞器的活体染色与观察线粒体活体染色与观察实验目的1．掌握细胞器活体荧光标记技术。2．观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点。实验原理对细胞的结构及功能的研究历来是细胞生物学的主要内容。活体染色是指使生活有机体的细胞或组织着色但对其又无毒害作用的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，使这些特殊结构易于被识别。体外活染又称超活染色，它是将活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，用染料溶液浸染，染料被选择性地固定在活细胞的某种结构上而显色。随着细胞生物学的实验研究技术发展，对细胞的研究正经历着从简单到复杂，从静态到动态，从单维度到多维度的发展。其中，细胞器的活体荧光标记技术是现代细胞生物学研究常用的重要实验技术。这种技术可以从分子水平上动态地研究活细胞中的各种生理活动，极大地增强了人们对细胞的认识能力。这种技术能够用来分析细胞的信号转导、物质运输、能量代谢和膜电位的变化等。现在，已经有许多细胞器特异的商业化荧光染料。Golgi-Tracker Red 是一种高尔基体红色荧光探针，可以用于活细胞高尔基体特异性荧光染色。Golgi-Tracker Red 为采用 Molecular Probes公司的 BODIPY TR 进行了荧光标记的 C5-ceramide。Golgi-Tracker Red 可以用于活细胞的高尔基体荧光标记，但不适合用于固定细胞的标记。 Golgi-Tracker Red 的最大激发光波长为589 nm，最大发射光波长为617 nm。BODIPY-FL- 神经酰胺是一种脂类物质，能特异地标记高尔基体。BODIPY-FL-神经酰胺的最大激发光波长是464 nm，最大发射光波长为532 nm。DiO-C6( 3)是一种短链碳酸化氰苷染料，可以标记包括内质网在内的多种膜性细胞器。但是，根据形态、结构特征，内质网很容易被识别。D10-C6(3)的最大激发光波长为484 nm，最大发射光波长为 501 nm。罗丹明 123 是一种阳离子荧光染料。 活体线粒体能够产生膜电位， 可以吸引罗丹明 123 进入线粒体。因此，罗丹明123 能够特异地标记线粒体。罗丹明123 的最大激发光波长为 504 nm，最大发射光波长为534 nm。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。这种染料会结合到DNA 的 A-T 富集...