细胞培养标准操作程序（SOP）1 目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。2. 适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。3. 操作规程：3.1 培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3 一 1 一 1 1000ml 培养液的配制 1、准备用品：培养粉、1000ml 烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH 仪、2〜3 天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3 粉、1000ml 无菌玻璃瓶（100mlx10 个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2〜3 个过滤器、注射器。紫外线照台 30min。2、将培养粉用 900ml 新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。3、充分搅拌，按说明添加成分（如 Invitrogen 公司的 RPMI-1640 配制 1000ml 需加 NaHCO3 粉2.0g,Invitrogen 公司的 DMEM 需加 NaHCO3 粉 3.7g 等），再充分搅拌。无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。4、用 1M（1mol/L）HCl 调 PH 至 7.0 左右（细胞适宜在 PH7.2〜7.4 生长，配制好后 PH 值会升高 0.2〜0.3，故配时调 PH 至 7.0 左右）。5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到 1000ml。6、溶解配链霉素 100 万 / 瓶 + 4ml 蒸馏水溶解 取 0.5ml 青霉素和 0.4ml 链霉素加入到 1000ml 培养液中，使其终浓度均为 100U/ml，充分搅拌混匀。7、在无菌操作台里用 0.22um 的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到 100ml 玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20°C 保存备用。注意：1）配制培养液及调节培养液 PH 值所使用的 HCI 和（或）NaOH 均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。2）准备的 100mh10 个玻璃瓶必须事先高压灭菌 !烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。3.1.2 PBS （平衡盐溶液）的配制 NaCl8gKCl0.2g+新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至 1000mlNa2HPO4*H2O1.56gKH2PO40.2g（1）无需调 PH 值，其成分溶解后 PH 为 7.4,不需除菌滤膜过滤除菌，放于 4C 保存，用前直接高压灭菌（高压时，装 PBS 的瓶子的瓶盖要插针头 !）（2）Na2HPO4*H2O1.56g 则 Na2HPO4*12H2O 需 3.4888g（3）如欲配制 500ml，以上成分减半即可3.1.3 0.25% 胰蛋白酶的配制 胰蛋白酶粉 2.5gEDTA（乙二胺四乙酸二钠）0.3gKCINa8.00.4+新鲜0.50.06NaHCO3Glucose...
