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第二章分子克隆工具酶基因工程工具酶限制性内切酶——主要用于DNA 分子的特异切割DNA 甲基化酶——用于DNA 分子的甲基化核酸酶——用于DNA 和 RNA 的非特异性切割核酸聚合酶——用于DNA 和 RNA 的合成核酸连接酶——用于DNA 和 RNA 的连接核酸末端修饰酶——用于DNA 和 RNA 的末端修饰其它酶类——用于生物细胞的破壁，转化，核酸纯化，检测等。第一节限制性核酸内切酶(restriction enzyme) 一、限制性内切酶的发现历史核酸酶：催化核酸酯键的水解核酸外切酶：作用于核酸链的末端(3′ 或 5 ′),逐个水解核苷酸。核酸内切酶：从核酸分子内部切断3′ ，5′ 磷酸二酯键。限制性核酸内切酶：在细菌细胞内存在的一类能识别并水解外源双链DNA 的核酸内切酶。1、细菌的限制——修饰现象细菌的限制——修饰作用发现细菌的限制（restriction）现象：寄主控制的专一性phageλ K R-M 系统的作用 :R-M 系统是细菌安内御外的积极措施。保护自身的DNA 不受制；破坏外源DNA 使之迅速降解细菌 R-M 系统的限制酶可以降解DNA ，为避免自身DNA 的降解，细菌可以修饰（甲基化酶）自身DNA ，未被修饰的外来DNA 则会被降解。个别噬菌体在被降解之前已经发生了修饰，则可免予被降解。限制性内切酶 本是微生物细胞中用于专门水解外源DNA 的一类酶，其功能是避免外源DNA 的干扰或噬菌体的感染，是细胞中的一种防御机制。由于R/M 现象的发现使得核酸内切酶成为基因工程重要的工具酶。2、限制性核酸内切酶的发现限制性核酸内切酶(restriction endonuelease)是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶(endo-deoxyribonuclease) 。它是可以将外来的DNA 切断，即能够限制异源DNA 的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA 却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA 分子内部进行的，故名限制性内切酶(简称限制酶 )。1968 Linn 和 Arber 从 E.coli B 中发现限制酶Ⅰ1970 Smith （美）在流感嗜血杆菌发现限制酶Ⅱ1978 W. Arber ，H. O.Smith ， Nathans 因发现限制性内切酶及对其功能研究的突出贡献获得诺贝尔奖金。限制性核酸内切酶（限制酶）：在细胞内能够识别双链DNA 分子中的特定核苷酸序列，并对DNA 分子进行切割的一种酶。功能：降解不同源DNA ，而不降解同源DNA 。3 、限制性核酸内切酶的命名若种名头 2 个字母相同则其中...