完整版分光光度法测细菌浓度11月18日VIP免费

用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度实验目的：通过 对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。 标准曲线做出后， 通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度，用于指导菌悬液的制备。实验设备：U-2900 型分光光度计波长为 600nm 比色皿厚度：cm实验材料：空白对照液：0.9%无菌氯化钠溶液稀释液： 0.9%无菌氯化钠溶液营养肉汤培养基实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物）实验步骤：1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，在 30～35℃恒温培养箱中培养18～24h。2. 在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液。具体为分别吸取营养肉汤培养液 0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml 到 10ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成7 种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。2.1 平板菌落计数法测活菌浓度取 14 个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取0.2ml 的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂2 块平板 . 37℃培养箱培养 72 h 后，可见菌落形成，选取菌落数在30~300 间的平板进行计数， 每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数. 计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。2.2 分光光度法测菌悬液吸收值同时将以上 5 种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用 0.9%无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录序号吸 取 原 培 养液的量（ ml）---原始菌液加 样 到平板 上 的量（ml）稀释倍数平板计数菌落数（cfu）吸光度值原始菌液的含菌量（ cfu）1 0.1 0.2 5 倍0.018 2 0.2 0.2 5 倍0.029 3 0.3 0.2 5 倍0.049 4 0.4 0.2 5 倍0.058 5 0.5 0.2 5 倍0.076 6 0.6 0.2 5 倍0.082 7 0.7 0.2 5 倍0.102 3 结果计算对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数，将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c. 根据所测出 A 值以及相对应的标准浓度c 值，作出标准曲线。