分子实验室、细胞实验室常用配方VIP免费

1（一）WB相关试剂及常用缓冲液RIPA（100mI）（最后要调pH为7.4）终浓度分子量称取Tris-HCI(pH7.4)50mM121.14605.7mgNaCI150mM58.44876.6mgTritonX-1001%1mI脱氧胆酸钠1%1gEDTA1mM292.24829.2248mgSDS0.1%0.1gPMSF（100mM）使用时每1ml加10ul10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度）AP粉末1gddH2010ml10％SDS（十二烷基硫酸钠）：SDS粉末10gddH20定容到100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡6X蛋白质samplebufferTris-HCl(1M,pH6.8)30mLSDS10g甘油30mLDTT（154.25）9.3g溴酚蓝0.06gddH20定容至100mL10XPBS缓冲液的配制：NaCl80gKCl2gNa2HPO414.4g（十二水合36g）KH2PO402.4g加800mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4，调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度PBST(1X)PBS(1X)500mlTween20500μl50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量Tris粉末242g冰醋酸57.1mlNa2EDTA·2H2O37.2g12ddH20定容到1L封闭液脱脂奶粉5g叠氮钠0.02g(现配现用时可不加)PBS定容到100mL染色液(室温)1L500ml200ml100ml甲醇500mL25010050乙酸100mL502010R250考马斯亮蓝0.5g0.25g0.1g0.05gH20400mL2008040脱色液：(室温)甲醇165mL乙酸50mLH20785mL8.8Buffer:（调pH至8.8,4度保存）100ml200mlTris18.17g36.34g10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200ml6.8Buffer:（调pH至6.8,4度保存）100ml200mlTris6．06g12.12g10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200ml转移缓冲液（10×transbuffer）：（常温保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6ddH20定容至1L定容至2L使用时甲醇200mL转移缓冲液（10×）100mLddH20700mL电泳缓冲液（10×）(runningbuffer)：（常温保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6SDS10g20gddH20定容至1L定容至2L10Х)TBS:（常温保存）23NaCl80.0gTris粉末24.2gddH20定容至1LTBST(1X)TBS(1X)500mlTween20500μlStrippingbuffer(可反复利用)温老师组配方10%SDS10mlΒ-巯基乙醇350lTris-HCI（pH6.8）6.25ml（6.06加到50mL水）加入ddH2O至50mLStrippingbuffer(可反复利用)郭老师给配方甘氨酸15gSDS1gTween201mlddddH2O1L作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。34（二）细胞和细菌培养基、抗生素LB培养基(当天灭菌后放4度存放)1000ml500ml300ml250ml200ml氯化钠10g5g3g2.5g2g蛋白胨10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1gddH20定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlLB平板：（当天灭菌后倒平板，放4度存放）1000ml500ml300ml250ml200ml氯化钠10g5g3g2.5g2g蛋白胨10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1g琼脂15g7.5g4.5g3.725g3gddH20定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlSOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁1MIPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3））溶液IPTG粉末2.383gddH20定容到10ml用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。Amp+(50mg/ml)Amp+粉末50mgddH201ml注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用Kana+(50mg/ml)Kana+粉末50mgddH201ml45注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用胰酶：抽滤，长期保存可放负20度粉末0.25gEDTA0.02-0.03g1XPBS100ml高糖DMEM培养基：抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠3.7gddH20定容到1L（用盐酸调pH值到：7.2-7.4）G418母液（100mg/ml）用0.22M滤菌，分装存于-20度粉末1gPBS10mlzeocin母液（100mg/ml）用0.22M滤菌，分装存于-20度粉末1gddH2O10mlBlasticidin（100mg/ml）用0.22M滤菌，分装存于-20度粉末0.3gPBS10ml56（三）利用His-tag从细菌中纯化蛋白配方透析液配方终浓度母液浓度量取体积Tris-HCl(pH:8.0)20mM1M20mlNaCl20mM4M5mlMgCl22mM1M2mlDTT1mM1M1ml甘油50%500mlddH2O472ml超声裂解液(lysisbuffer)：2011年做蛋白纯化时用Na3PO4（164）8.2g（50mM）NaCl(58.5)17.55g（3...