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分子实验室、细胞实验室常用配方VIP免费

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1(一)WB相关试剂及常用缓冲液RIPA(100mI)(最后要调pH为7.4)终浓度分子量称取Tris-HCI(pH7.4)50mM121.14605.7mgNaCI150mM58.44876.6mgTritonX-1001%1mI脱氧胆酸钠1%1gEDTA1mM292.24829.2248mgSDS0.1%0.1gPMSF(100mM)使用时每1ml加10ul10%过硫酸铵溶液AP(分装保存于-20度)AP粉末1gddH2010ml10%SDS(十二烷基硫酸钠):SDS粉末10gddH20定容到100ml注意:用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡6X蛋白质samplebufferTris-HCl(1M,pH6.8)30mLSDS10g甘油30mLDTT(154.25)9.3g溴酚蓝0.06gddH20定容至100mL10XPBS缓冲液的配制:NaCl80gKCl2gNa2HPO414.4g(十二水合36g)KH2PO402.4g加800mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4,调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度PBST(1X)PBS(1X)500mlTween20500μl50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液配制1L溶液各成分的用量Tris粉末242g冰醋酸57.1mlNa2EDTA·2H2O37.2g12ddH20定容到1L封闭液脱脂奶粉5g叠氮钠0.02g(现配现用时可不加)PBS定容到100mL染色液(室温)1L500ml200ml100ml甲醇500mL25010050乙酸100mL502010R250考马斯亮蓝0.5g0.25g0.1g0.05gH20400mL2008040脱色液:(室温)甲醇165mL乙酸50mLH20785mL8.8Buffer:(调pH至8.8,4度保存)100ml200mlTris18.17g36.34g10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200ml6.8Buffer:(调pH至6.8,4度保存)100ml200mlTris6.06g12.12g10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200ml转移缓冲液(10×transbuffer):(常温保存)1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6ddH20定容至1L定容至2L使用时甲醇200mL转移缓冲液(10×)100mLddH20700mL电泳缓冲液(10×)(runningbuffer):(常温保存)1L2L甘氨酸144g288gTris粉末30.3g60.6SDS10g20gddH20定容至1L定容至2L10Х)TBS:(常温保存)23NaCl80.0gTris粉末24.2gddH20定容至1LTBST(1X)TBS(1X)500mlTween20500μlStrippingbuffer(可反复利用)温老师组配方10%SDS10mlΒ-巯基乙醇350lTris-HCI(pH6.8)6.25ml(6.06加到50mL水)加入ddH2O至50mLStrippingbuffer(可反复利用)郭老师给配方甘氨酸15gSDS1gTween201mlddddH2O1L作这个buffer洗20min,然后用PBST洗3次,再重新封闭孵抗体。34(二)细胞和细菌培养基、抗生素LB培养基(当天灭菌后放4度存放)1000ml500ml300ml250ml200ml氯化钠10g5g3g2.5g2g蛋白胨10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1gddH20定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlLB平板:(当天灭菌后倒平板,放4度存放)1000ml500ml300ml250ml200ml氯化钠10g5g3g2.5g2g蛋白胨10g5g3g2.5g2g酵母提取物5g2.5g1.5g1.25g1g琼脂15g7.5g4.5g3.725g3gddH20定容至1000ml定容至500ml定容至300ml定容至250ml定容至200mlSOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁1MIPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3))溶液IPTG粉末2.383gddH20定容到10ml用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。Amp+(50mg/ml)Amp+粉末50mgddH201ml注意:分装保存于-20度,使用时按1000:1的比例用Kana+(50mg/ml)Kana+粉末50mgddH201ml45注意:分装保存于-20度,使用时按1000:1的比例用胰酶:抽滤,长期保存可放负20度粉末0.25gEDTA0.02-0.03g1XPBS100ml高糖DMEM培养基:抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠3.7gddH20定容到1L(用盐酸调pH值到:7.2-7.4)G418母液(100mg/ml)用0.22M滤菌,分装存于-20度粉末1gPBS10mlzeocin母液(100mg/ml)用0.22M滤菌,分装存于-20度粉末1gddH2O10mlBlasticidin(100mg/ml)用0.22M滤菌,分装存于-20度粉末0.3gPBS10ml56(三)利用His-tag从细菌中纯化蛋白配方透析液配方终浓度母液浓度量取体积Tris-HCl(pH:8.0)20mM1M20mlNaCl20mM4M5mlMgCl22mM1M2mlDTT1mM1M1ml甘油50%500mlddH2O472ml超声裂解液(lysisbuffer):2011年做蛋白纯化时用Na3PO4(164)8.2g(50mM)NaCl(58.5)17.55g(3...

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