RNAi技术及其应用VIP免费

RNAI 技术及其应用 提要： RNA 干扰(RNA interference ,RNAi) 现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物 mRNA 存在同源互补序列的双链 RNA(dou ble strand RNA ,dsRNA) 导入细胞后,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失,这一过程属于转录后基因沉默机制( posttranscriptional gene siliencing , PTGS) 范畴。RNAi 广泛存在于生物界,从低等原核生物,到植物,真菌,无脊椎动物,甚至近来在哺乳动物中也发现了此种现象,只是机制也更为复杂。 RNA 干涉(RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法，该技术通过双链 RNA的介导，可以特异性地阻断或降低相应基因的表达。在肿瘤研究中，通过 RNAi 技术可以选择性地抑制人类肿瘤相关基因的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长。该技术的应用为癌症的基因治疗提供了新的方法。 癌基因的激活认为是肿瘤发生的根本原因之一，各种癌基因都可以成为肿瘤基因治疗的靶点。利用基因家族中多个基因具有同一段同源性很高的保守序列这一特性,针对这一区段序列设计相应的 siRNA，通过体外合成或构建在体内表达 siRNA 的载体的方法转入细胞中，可以特异性的封闭这些基因的转录产物而不影响其他基因的表达。 作用机制： RNAi 的作用机制. RNAi 的第一步是,ds RNA（双链 RNA） 在内切核酸酶(一种具有RNase Ⅲ样活性的核酸酶，称为 Dicer.) 作用下加工裂解形成21～25 nt （核苷酸）的由正义和反义序列组成的干扰性小 dsRNA ,即 siRNA。果蝇中 RNase III 样核酸酶Dicer 含有解旋酶(helicase) 活性以及 dsRNA 结合域和 PAZ 结构域. 已发现在哺乳动物中也存在 Dicer 同类物. 近年来研究发现,干扰性小 RNA(siRNA) 是 RNA 干扰作用(RNAi) 赖以发生的重要中间效应分子. siRNA 是一类特殊双链 RNA(dsRNA) 分子,具有特征性结构,即 siRNA 的序列与所作用的靶mRNA 序列具有同源性; siRNA 两条单链末端为5′端磷酸和3′端羟基. 此外,每条单链的 3′端均有2～3 个突出的非配对的碱基。 细胞中 dsRNA 的形成是 RNAi 的第一步. 获得 dsRNA. 主要有三种途径： 一：细胞内产生的 mRNA 在 RNA 聚合酶的作用下，依一条单链的 RNA 合成一条双链 RNA；二：体外人工合成，原理类似于上；三：有一些长的 RNA 具有反向互补序列，它会自己和自己互补，产生一个茎环结构，这个结构很容易被核酸内切...