1、 取组织块(0
2g~ 1g)最少可到 2~5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入 5 或 10ml 的小烧杯内 2 、 用 移 液 管 量 取 预 冷 的 匀 浆 介 质 ( ph7
01mol/L Tris-HCL, 0
0001MOL/LEDTA-2Na,0
01mol/L 蔗糖 0
8%的氯化钠溶液)或者用 0
86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的 9 倍,用移液管或移液器取总量的 2/3 的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中)
3、匀浆的方式有多种:手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融
手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8 分钟),充分研碎,使组织匀浆化
机器匀浆:用组织捣碎机 10000~15000r/min 上下研磨制成 10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间 10 秒/次,间隙 30 秒,连续 3~5 次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间
超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用 Soniprep150 型超声波发生器以振幅 14 微米超声处理 30 秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用 40 安培,5 秒/次,间隙10 秒反复 3~5 次
反复冻融:培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆,也可以反复冻溶 3 次左右(即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰,溶解,再结冰,再溶解,反复 3次左右),但有部分酶活力会受影响
取少量组织匀浆做涂片(直接涂片、染色均可),显微镜下观察细胞