Northern blot：是 DNA/RNA 的杂交，它是一项用于检测特异性 RNA 的技术，RNA 混合物首先按照它们的大小和相对分子量通过变性琼脂糖凝胶电泳加以分离，凝胶分离后的 RNA通过 southern 印迹转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与标记的探针进行杂交反应，通过杂交结果分析可以对转录表达进行定量或定性。它是研究基因表达的有效手段。与Southern blot相比，它的条件更严格些，特别是 RNA 容易降解，前期制备和转膜要防止 Rnase 的污染。 实验步骤：1.用具的准备 2．用 RNAZaP 去除用具表面的 RNase 酶污染 3．制胶 4. RNA 样品的制备 5.电泳 6.转膜 7.探针的制备 8.探针的纯化及比活性测定 9．预杂交 10．探针变性11．杂交 12．洗膜 13．曝光14．去除膜上的探针 15．杂交结果 半定量 PCR 要求比普通 PCR 更严格一些，另外往往通过转膜后的同位素杂交检测或凝胶成像后的灰度测定比较样品间的差异。 半定量 RT-PCR 一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用，用于测定体内目的基因的表达增加减少与否，即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因（如β -actin）的电泳带的相对含量比较，观测目的基因表达增减，另外还要做一个β -actin 的内参照对照。 实时荧光定量 PCR 技术，是指在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1． 实时荧光定量 PCR 无需内标 2． 内标对实时荧光定量 PCR 的影响 Sybr green（荧光染料掺入法）和 Taqman probe（探针法） 检测两种蛋白质相互作用方法 1 共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析 2 蛋白质亲和色谱 基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），当细胞抽提液经过改基质时，可与改固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有吸附的非目标蛋白则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或者洗脱条件而回收下来。 3 免疫共沉淀 免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。改法的优点是蛋白处于天然状态，蛋白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响；可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。缺点：免疫共沉淀同样不能保证沉淀的蛋白复合物时候为直接相互作用的两种蛋白。另外灵敏度不如亲和色谱高 4 Far-Western 又叫做亲和印记。将 PAGE 胶上分离好的凡百样品转移到硝...
