沉淀反应基本概念•沉淀反应可溶性抗原与相应抗体在适当条件下反应生成沉淀物•特点–反应物可溶（溶液）–生成物为沉淀（抗原抗体均为多价，相互结合，形成空间网格，体积变大而从溶液中析出）–抗原抗体的比例对试验现象的影响明显•类型反应场所检测方法液相沉淀试验凝胶扩散试验凝胶免疫电泳试验液相内沉淀试验•环状沉淀试验–原理将抗原液叠加在已知的抗体溶液上面，在两液的交界面抗原抗体发生反应生成白色沉淀环抗体抗原沉淀环–方法评价简便快速、但只能定性且灵敏度低，少用•絮状沉淀试验–原理抗原溶液与抗体溶液混合，在电解质存在的条件下，两者结合出现肉眼可见的絮状沉淀–方法评价方法简单，不需特殊设备，灵敏度低，受抗原抗体比例影响明显，少用；可用于确定对应抗原抗体反应的最适比•免疫浊度测定–一定比例的抗原抗体反应可生成肉眼不可见的、一定大小的复合物–光束通过该溶液时，免疫复合物对光会产生作用（吸收、折射），作用的大小与复合物的多少呈正相关–根据测量手段和方法的不同可分为：透射比浊法、终点散射比浊法和速率散射比浊法透射比浊法•原理–在固定且过量的抗体中加入待测的抗原，经过一段时间反应后生成复合物，复合物的量与待测抗原含量成正比–当光束通过该溶液时，被复合物吸收、反射，导致透射光的减少，减少的程度与复合物的量成正比–以已知抗原的浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，建立标准曲线，通过测定待测抗原反应后溶液的吸光度大小，在曲线上测出待测抗原的浓度•方法评价–灵敏度较高、重复性较好、操作简便、对仪器要求不高–反应时间长、参加反应的抗原抗体比例要保证抗体过剩且不能极度过剩终点散射比浊法•原理–为改良的透射比浊法（测定散射光强度）•方法评价–方法灵敏、可自动化–反应时间适当、影响因素较多、需特殊仪器速率散射比浊法•原理–在过量的抗体中加入待测的抗原，两者反应生成免疫复合物，在反应达终点之前，复合物数量递增–在不同的时间点上，复合物增加的量（速率）是不同的，而最大速率（峰值）只有一个时间点–在反应的过程中，峰值出现的时间点很快出现并能被特殊的仪器捕捉、测出–峰值的大小与待测抗原的含量成正比•方法评价–测量快速、灵敏、精密度高、稳定性好–需特殊仪器凝胶的制备•原料–固体粉末（琼脂、琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺）–电解质液•过程按要求把一定比例（1%）的固体粉末与电解质液混合，加热助溶，冷却，形成具有三维空间网孔的半固体结构•性质–实为流动的液相–网孔的大小与凝胶的浓度成反比–小分子的颗粒在凝胶中自由运动，动力来源于物质的浓度差，而大分子物质的运动则受到网孔的限制单向琼脂扩散试验•原理Ab待测抗原在含在一定量的抗体中自由扩散在抗原抗体比例合适处形成大分子的抗原抗体复合物而被限制在网孔中，形成肉眼可见的沉淀环待测抗原与沉淀环的直径成正比方法评价定量检测物质、方法稳定、简便、无需特殊仪器灵敏度稍差双向琼脂扩散试验•原理–抗原抗体在凝胶中自由扩散，发生相遇–在比例合适处形成肉眼可见的沉淀线•类型–成对孔、三角形孔、梅花形孔成对孔ABCDEFAgAb应用定性：沉淀线的有无相对浓度：沉淀线的位置（靠近浓度小的一侧）相对扩散率：沉淀线的形状（弯向扩散慢的一侧）三角形孔AbAg1Ag2AbAg1Ag2AbAg1Ag2沉淀线吻合：两种抗原完全相同沉淀线相交：两种抗原完全不同沉淀线相切：两种抗原之间部分相同梅花形孔1:21:41:81:161:321:64Ag中间孔为Ag、周边孔为倍比稀释Ab出现沉淀线孔的Ab最高稀释度为待测抗体的效价免疫电泳技术•带电颗粒在电场中的运动–抗原抗体在凝胶中为带电颗粒–在电场的作用下向相反电极运动为电泳–某些凝胶（琼脂）固体骨架上基团为阴离子，感应其附近的水分子带上正电荷，这种水分子在电场的作用下运动方向为正极到负极，同时推动颗粒的运动为电渗–颗粒的运动为电泳和电渗的合运动•类型–免疫电泳、火箭免疫电泳、对流免疫电泳免疫电泳原理－＋电泳：分离复杂组分（不同的蛋白质的PI、分子量不同，在电场中的运动速度不同，相同时间在凝胶中的停留位置不同）双扩：在与电泳平行方向挖槽，加混和抗...
