生物制品技术疫苗的概念及分类疫苗（vaccines）根据我国农业部文件规定：“由特定细菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、支原体等微生物及寄生虫制成的主动免疫制品，一律称为疫苗”。1.活疫苗活疫苗是指抗原物质可在体内繁殖，能刺激机体产生系统的免疫应答和局部免疫应答的疫苗。活疫苗特点：能够刺激机体产生体液免疫和细胞免疫；免疫力持久；有利于清除局部病毒；产量高、生产成本低。缺点：活疫苗残毒动物群体内持续传代后，有毒力增强和反祖的危险；可以出现不同抗原的干扰现象。(1)弱毒疫苗弱毒疫苗是由微生物自然强毒通过物理、化学或生物处理，并经连续传代和筛选培养而成的，丧失或减弱了对宿主动物致病力，但仍然保存良好免疫原性和遗传特性的毒株；或从自然界筛选、具有良好免疫原性的自然弱毒株，经培养后制备的活疫苗。弱毒疫苗又可分为同源疫苗和异源疫苗。同源疫苗(homologousvaccines)：用所制备疫苗的菌株或毒株来自于预防传染病的本动物，这种疫苗又称为同种疫苗。异源疫苗(heterogenousvaccine)：利用具有类属性保护性抗原非同种微生物所制成的疫苗，称为异源疫苗。弱毒疫苗(2)重组活疫苗这种疫苗菌(毒)株基因变化一般不是点突变，故其毒力较为稳定，反祖机率小，如伪狂犬病基因缺失疫苗。(3)基因工程活载体苗此类疫苗不仅具有活疫苗和死疫苗的有点，而且对载体病毒或细菌以及插入基因相关病原体的感染均有保护力。同时，一个载体可以表达多个保护抗原基因，可获得具有多价或多联特性的疫苗。2.死疫苗死疫苗特点：抗原不能在动物体内繁殖；比较安全，不发生全身毒性作用；无毒力反祖现象；有利于制备多价或多联疫苗；制品稳定受外界环境影响少。缺点：此类疫苗免疫剂量大，生产成本高，需多次免疫，故常需要用佐剂或携带载体系统来增强免疫效果，一般只能诱导机体产生体液免疫效应。(1)灭活疫苗灭活疫苗，又称死苗制造灭活苗菌(毒)种通常是标准强毒或免疫原性优良的弱毒株。菌(毒)株经人工大量培养后，用理化方法将其杀死(灭活)后制成的疫苗，即灭活疫苗。（一般灭活苗）自家灭活苗：此种疫苗可用以治疗慢性的、反复发作而用抗生素治疗无效的细菌性感染或病毒性感染，如顽固性葡萄球菌感染症、小儿顽固性哮喘。这是一种严格限制的灭活苗，必须小计量反复注射，决不可施于另一同样的患者。灭活疫苗灭活疫苗脏器或组织灭活苗：利用病、死动物的含病原微生物脏器制成乳剂，加甲醛等灭活脱毒所制成的疫苗。(2)类毒素细菌外毒素，用适当浓度(0.3%-0.4%)甲醛溶液处理，使之脱毒而制成的生物制品，称为类毒素(toxoid)。细菌外毒素为蛋白质，兼有毒性及抗原性，能刺激机体产生特异性的中和其本身的抗体——抗毒素。外毒素经甲醛溶液脱毒后失去毒性，但保留较强的免疫原性成为类毒素，类毒素比毒素更稳定。(3)亚单位苗依照“取其精华，去其糟粕”的原则，撇弃生物体中具有毒副作用的成分，而只吸纳其中的病原部分制造而成的。亚单位苗可免除出全菌体和全病毒疫苗的一些副作用，保证了疫苗的安全性，但制造成本较高，通常免疫保护效果低于全菌体和全病毒疫苗。(4)基因工程亚单位苗利用基因工程技术，取出微生物中编码保护性抗原肽段的基因，再将此基因与质粒等载体重组，导入受体菌(细菌、酵母)或细胞，使之在受体菌或细胞内高效表达，产生大量保护性肽段，提取此保护性肽段，加佐剂后制成的疫苗，即基因工程亚单位苗。转化蛋白表达定性分析E.coliIPTG诱导WesternblotSDS-PAGE蛋白纯化获得单一蛋白奠定研究基础诱导免疫制备抗体保护性抗原基因Pet30TMIR(5752bp)HindIIIBamHiTMIRKanOriginHis.Tagpfast-gagenv7100bpAmpXbaIXhoITn7RTn7LPoLhNeogaggp120DH10pfast-gagenv7100bpAmpXbaIXhoITn7RTn7LPoLhNeogaggp120筛选重组子提取重组Bacmid转座转染LacZKanGm表达及检测TranscriptionTermination(TT)MCSBglⅡPichiaExpressionvectorforiHISAmprBglⅡ3´AOXBglⅡBglⅡ重组质粒构建线性化电转化重组子筛选表达与检测TTGneofinterestHIS43’AOX1Geneofinterest5’PAOX1HIS43’AOX15’AOXAOX1ORF3’AOX1TTTT5’PAOX1Geneofinterest5’PAOX1HIS43’AOX1TTBglⅡBglⅡPichiaGenomePichia...
