利用不同的方法筛选和鉴定转化子 摘要:通过使用不同的方法，从大肠杆菌中筛选和鉴定出转入了GFP 基因并表达出GFP 的菌株。实验先用蓝白斑筛选得到含有载体的转化子，之后用菌落PCR 对其中的重组子进行进一步鉴定，最终通过对表达的产物的检测确证是否能表达出GFP。实验结果表明挑选出来的菌株并没有表达出GFP，需要挑选其他菌落继续实验。 关键词:蓝白斑筛选、菌落PCR、GFP、蛋白质检测 前 言 我们采用的是目前应用最广泛、技术最成熟、同时也是最经典的微生物基因重组，作为载体的质粒，我们需要选择或者构建带有多克隆位点和带有抗性基因的质粒，前者有利于基因顺利导入到受体细胞，后者方便我们对转化产物进行筛选；对于受体细胞，我们所选择使用的大肠杆菌，具有遗传背景清楚，结构简单，表达效率高，容易获取等优点，已经建立起一套完善成熟的表达系统，是目前转基因领域最受欢迎 、使用最普 遍 的系统之一。 GFP 自 从发 现 以 来，已经获得了广泛充 足 的应用，是生物领域的重要材 料 绿 。绿 色 荧光 蛋白本 身 无 毒 ，且 不需要其他辅 酶 或者反 应底 物，在 紫 外 或者蓝光 激 发 下 就 可 以 自 主 发 光 ，而 且 有较 好 的稳 定性，当 其基因与 其他蛋白质表达基因相 融 合 时，该 蛋白质既 能保 持 原 有活性，发 光 能力 也不受影 响 ，这 意 味 着 我们可 以 将 GFP 与 我们想 要了解 的蛋白质相 接 合 在 一起，将 GFP 作为荧 光 标 签 ，对蛋白质的位置 、运 动 、活 性以 及 相 互 作用等机 理 进行追 踪 和观 察 ，因为这 种 特 性，绿 色 荧 光 蛋白具有其他报 告 蛋白无 法比 拟 的优点，已经在 生物研 究 中获得广泛的应用。 我们已经通过一系列 的实验操 作，获取GFP 基因，用PCR 技术将 其扩 增 并连 接 到载体质粒 pMD19-T Vector 上 ，用CaCl2 法将 其转入到大肠杆菌中，经过本 次 实验的筛选和鉴定，构成了完整 的转基因操 作流 程 ，将 我们的课 堂 学 习 和实际 操 作结合 起来，从而 对转基因技术有一个 最直 接 的认 识 。尽 管 在 当 下 中国 ，转基因技术备 受争 议 ，但 是每 一名 生物专 业 的学 生，都 应学 习 了解 国 际 科 学 社 会 在 转基因领域上 所取得的巨 大成就 ，并看 到其广泛的应用前景和巨 大...
