Applied Biosystems QuantStudio 6&7 实时荧光定量PCR 仪 V1.X 绝对定量简易操作流程绝对定量实验简易操作流程1. 双击桌面图标，或从Start > All programs > AppliedBiosystems > QuantStudio™ Real-Time PCR Software > QuantStudio™Real-Time PCR Software 开启软件。进入主界面后选择“Experiment Setup”。2. 进入“Setup”下的“Experiment Properties”界面。绝对定量实验简易操作流程2.1 输入实验名称(Experiment Name)。2.2 选择仪器类型及 Block 类型。2.3 选择绝对定量实验类型，“Standard Curve”。2.4 选择试剂种类。Taqman 探针法选择“Taqman Reagents”，SYBR 染料法选择“SYBR Green Reagents”。2.5 选择运行模式。普通试剂选择“Standard”；快速试剂选择“Fast"。3 . 选择“Setup”下的“Define”界面，设置基因名称(Target) 和样品名称(Sample)。绝对定量实验简易操作流程3.1 在“Targets”下点击“New”，添加待测基因。在“Target Name”中编辑基因名称；“Reporter”和“Quencher”中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。对于“Quencher”的选择，如果是 MGB 探针，请选择 NFQ-MGB；如果是 TAMRA 探针，请选择 TAMRA；如果是其他形式的非荧光淬灭基团则选择"None"。3.2 在“Samples”下点击“New”，添加待测样品。在“Sample Name”中编辑样品名称。绝对定量实验简易操作流程4 . 选择“Setup”下的“Assign”界面，编辑样品板。4.1 利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在“Task”选项中指定该反应孔的类型 (S 代表标准品，U 代表未知样本，N 代表阴性对照)。4.2 设置标准曲线：利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔 (一般情况下，每个梯度设置至少三个副孔)，而后勾选左侧的基因，在“Task”选项中选择S，并在“Quantity”中输入标准品量。重复上述操作，完成标准曲线其他浓度点的设置 (建议设置至少 5 个梯度)。绝对定量实验简易操作流程5. 选择“Setup”下的“Run Method”界面，编辑运行条件。6. 选择“Run”下的“Amplification Plot”界面，点击 “Save As”保存文件，击 “Start Run”开始运行。绝对定量实验简易操作流程7 . 实验运行结束后，进入“Analysis”界面，点击右上角的“Analyze” 按钮分析数据并查看扩增结果。绝对定量实验简易操作流程7.1 设置基线和阈值线：软件默认使用“Auto”功能自动设定基...
