1 中和试验 动物受到病毒感染后,体内产生特异性中和抗体,并与相应的病毒粒子呈现特异性结合,因而阻止病毒对敏感细胞的吸附,或抑制其侵入,使病毒失去感染能力。中和试验 (Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础,以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据,来判定免疫血清中和病毒的能力。 中和试验常用的有两种方法:一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合,另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合;然后把血清-病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后,接种于敏感细胞、鸡胚或动物,测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡,说明血清中没有相应的中和抗体。中和反应不仅能定性而且能定量,故中和试验可应用于: 1. 病毒株的种型鉴定:中和试验具有较高的特异性,利用同一病毒的不同型的毒株或不同型标准血清,即可测知相应血清或病毒的型,所以,中和试验不但可以定属而且可以定型。 2. 测定血清抗体效价:中和抗体出现于病毒感染的较早期,在体内的维持时间较长。动物体内中和抗体水平 的高低 ,可显 示 动物抵 抗病毒的能力。 3. 分 析 病毒的抗原 性。 毒素 和抗毒素 亦 可进 行 中和试验,其方法与病毒中和试验基本 相同。用组 织 细胞进 行 中和试验,有常量法和微 量法两种,因微 量法简 便 ,结果易 于判定,适于作大 批 量试验,所以近 来得 到了 广 泛 的应用。 (一) 定血清-稀释病毒法(病毒中和试验) 1 . 病毒毒价的测定 毒价单 位 :衡 量病毒毒价(毒力)的单 位 过 去多 用最 小 致 死量(MLD),即经 规 定的途 径 ,以不同的剂 量接种试验动物,在一定时间内能致 全 组 试验动物死亡的最 小 剂 量。但由 于剂 量的递增 与死亡率 递增 不呈线 性关 系,在越 接近 100% 死亡时,对剂 量的递增 越 不敏感。而一般 在死亡率 越 接近50% 时,对剂 量的变化 越 敏感,故现多 改 用半 数致 死量(LD50)作为毒价测定单 位 ,即经 规 定的途 径 ,以不同的剂 量接种试验动物,在一定时间内能致 半 数试验动物死亡的剂 量。用鸡胚测定时,毒价单 位 为鸡胚半 数致 死量(ELD50)或鸡胚半 数感染量 (EID50)。用细胞培 养 测定时,用组 织 细胞半 数感染量(TCID50)。在测定疫苗 的...