2003年1月5号,“神舟”四号准确着陆。这次历时6天零18小时的太空飞行,开展了多项在轨研究,其中有一项被媒体描述成“太空婚礼”的生物实验。植物细胞“新人”-是黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体,动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞,两批新人同时在“产房”-电融合仪内孕育新生命。这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术?植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术学习目标一、简述动物细胞融合技术二、简述单克隆抗体制备过程二、简述单克隆抗体制备过程三、了解单克隆抗体的特点和应用一、动物细胞融合一、动物细胞融合又称为细胞杂交。指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。(一).动物细胞融合概念1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用方法有哪些?4、动物细胞融合能用上述方法吗?还有其他方法吗?酶解法,纤维素酶和果胶酶。无需,因为动物细胞无细胞壁。物理方法:离心、振动、电激;化学方法:聚乙二醇能;还可以利用灭活的病毒进行诱导病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜连接细胞膜被病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂交细胞5、为什么灭活的病毒能作为诱导剂?66、为什么细胞融合过程中使用、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活?不灭活行吗?的病毒需要灭活?不灭活行吗?不灭活的病毒会感染细胞,而不能诱导细胞融合利用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,保留病原体的抗原结构77、动物园细胞融合完成的标志是什么?、动物园细胞融合完成的标志是什么?细胞核融合因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。动物细胞膜融合过程(二)原理:细胞膜的流动性。(三)促进细胞融合方法物理法:电激、振动、离心等化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒(最常用)不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞(杂交细胞)进行有丝分裂(动物细胞培养技术)(四)动物细胞融合过程产生单核杂交细胞,(即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。)(五)结果2、最重要的用途是制备单克隆抗体。(七)用途(六)优点:1、成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法(同左)生物:灭活的病毒物理(离心、振动、电激)化学(聚乙二醇)诱导融合方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合过程细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目(八)植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较•人们获得抗体的传统方法是什么?动物体内刺激抗体筛选单一浆细胞并克隆不能无限增殖产生大量抗体抗原浆细胞•这种方法的缺点是什么?血清二、单克隆抗体二、单克隆抗体每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体体内产生的特异性抗体多达百万种产量低、纯度低,制备的抗体特异性差。如何获得化学性质单一、特异性强的抗体?杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体,又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞能无限增殖++一个浆细胞只分泌一种特异性抗体设计方案:(一).单克隆抗体的概念由单个B淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。(二).单克隆抗体的制备过程由单个B淋巴细胞(浆细胞)经过增殖(有丝分裂)形成的细胞群,该过程称为单克隆。效应B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合(只考虑两两融合)培养液中细胞有几种类型?融合细胞几种类型?骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞,克隆专一抗体,检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养11、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第11次筛选目...