2025年临床免疫学和免疫检验第八章荧光免疫技术讲义VIP免费

第八章 荧光免疫技术第一节 概述 荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。 一、荧光的基本知识 1.荧光：荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长不不大于激发光波长的光。 2.发射光谱：发射光谱是指固定激发光波长，在不同波长下所统计到的样品所发射的荧光强度谱图。激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。荧光物质在吸取光能后，即刻发射荧光，一旦停止供能，荧光随即消失。 3.激发光谱：激发光谱是指固定检测发射光荧光波长，用不同波长的激发光照射样品所统计到的对应的荧光发射强度谱图。 4.荧光效率；在一定范畴内，荧光强度与激发光强度呈正有关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。 5.荧光寿命：荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。 6.荧光淬灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、酚、I－、硝基苯等）作用下，发射荧光削弱甚至消退称为荧光淬灭。 7.荧光偏振。 二、荧光物质 （一）荧光色素 1.异硫氰酸荧光素（ FITC ） ：为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或乙醇等溶剂。分子量为389.4kD，最大吸取光波长为 490～495nm，最大发射光波长为 520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。其重要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感；②普通切片标本中的绿色荧光少于红色荧光。 2.四乙基罗丹明（RB200）：不溶于水，易溶于乙醇和丙酮。性质稳定，可长久保存。最大吸取光波长为 570nm，最大发射光波长为 595～600nm，呈橘红色荧光。 3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：最大吸引光波长为 550nm，最大发射光波长为 620nm，呈橙红色荧光。 4.藻红蛋白（R-RE）：最大吸引光波长为 565nm，最大发射光波长为 578nm，呈明亮的橙色荧光。 （二）其它荧光物质 1.镧系螯合物：其中以 Eu3＋应用最广。Eu3＋螯合物的激发光波长范畴宽，发射光波长范畴窄，荧光衰变时间长，最合用于时间分辨荧光免疫测定。 2.酶作用后产生荧光的物质：4-甲基伞酮-β-D 半乳糖苷本身无荧光，受 β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光。其它如碱性磷酸酶的底物是 4-甲基伞酮磷酸盐，辣根过氧化物酶的底物是对羟基苯乙酸等。 第二节 荧光抗体技术 荧光抗体技术是以荧光素标记抗体，与切片中组织或细胞抗原反映，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位，借此对组织细胞抗原进...