多聚赖氨酸(PolyLLysine)的配制、保存、使用总结VIP免费

因为自己做PC12 细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。 注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。 一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml 进行包被。 二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap 三、我配成1mg/ml 的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10 倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。 多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。 四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用 PBS 配,但没写 PH,浓度，向各位请教。 答：PH 应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠 7.650 g，无水磷酸 氢二钠 0.724 g，磷酸二氢钾 0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠 溶液调 pH 值为7.0~7.4，经 121℃灭菌 15 分钟 五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？ 答：Sigma 的产品说明书上写的很明白的。 另外，有本书上是这么写的，供参考： Poly-lysine-coated tissue culture surfaces To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry. To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysi...