GTI血小板本身抗体检测试剂盒(GTI-PAKAUTO )注:按照每人份使用1条进行实验,阴性对照为1条,具体环节请见原始英文使用阐明书。用去离子水稀释10x洗液,1倍体积Conc. Wash + 9倍体积去离子水。在统计纸(RS)上标记检测格局。1.用稀释液SD按照3:1比例稀释阴阳性对照、病人血清。稀释液SD量血清量PC150μl50μlNC300μl100μlPatient serum 300μl100μl2.从病人血小板及正常血小板中分离得到血小板扣A)取由EDTA 抗凝的血样,离心(110-150rcf,10-15min ),得到富含血小板的血浆(PRP)。B)将PRP移入一种干净的多聚丙烯管中,离心(1rcf, 5-10min),得血小板扣。弃掉血浆。C)向血小板扣中加入500ul 细胞重悬防腐液( CRP),用小枪头轻轻吹打混匀。将此血小板悬浊液移入离心管中,用最少500ul CRP洗3次。D)制备含1-5 x 107血小板的血小板扣:用CRP重悬上步的血小板扣,将血小板的浓度调节为每微升悬液含10000-50000个血小板。 取1ml 此悬液入离心管,离心1rcf, 5min。(或者直接取10-15ul 体积的血小板扣也可,此量足以制备血小板洗脱液)3.制备血小板对照A)向阳性血小板对照(PCP)、阴性血小板对照(NCP)中加入500ul CRP,室温放置最少10分钟使之水化。轻轻混匀后离心1rcf, 5-10min。吸干液体残留以得到干燥的血小板扣。注意:最佳用新鲜的正常血小板制备正常血小板洗脱液,如果没有新鲜的血小板再用试剂盒中提供的干正常血小板。4.制备洗脱液A)在制备洗脱液前要确保血小板已完全沉淀,且不混有残留的CRP。B)向已制备的血小板扣中加入180ul 洗脱液(ES),枪头吹打混匀,室温放置2分钟。离心1rcf, 5min。C)快速将洗脱液转移到一种干净的离心管中,加180ul BS , 充足混匀,离心1rcf, 10min。5.立刻进入下一步实验,或将血小板洗脱液放-80度冻存。注意:切勿稀释血小板洗脱液。6.向每个微孔内加300ul 用去离子水稀释好的洗液,室温放置5-10分钟。7.甩干,倒扣于吸水纸上。8.向对应孔内分别加入50ul 血小板洗脱液、已稀释好的对照血清、患者血清。注意:空白孔中不加任何血清或洗脱液;如果一次检测多个样本,只需做一组对照(阴、阳性血清对照,阴、阳性洗脱液对照);将每一条都做好标记,以免出错。9.盖膜,37度孵育30-35分钟,孵育时板底要接触到水,如果接触不到水,应延长孵育时间5-8分钟。10.用稀释液SD 1:100稀释抗-IgG。稀释液SD量抗-IgG量每次2条μl20μl每次6条6000μl60μl11. 取...