SHP-1SHP-1基因甲基化在急性髓基因甲基化在急性髓系白血病和慢性髓系白血病系白血病和慢性髓系白血病中的意义中的意义导师：王亚柱导师：王亚柱学生：张欣欣学生：张欣欣课题来源：自选课题研究类型：基础研究立题依据（一）白血病简介白血病（leukemia）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病，在恶性肿瘤所致的死亡率中，白血病在全国各年龄恶性肿瘤居第6位(男)和第8位(女)，在儿童及35岁以下成人中居第1位。目前，其病因和发病机制尚不十完全清楚，随着分子生物学技术的发展，寻找相关基因以探究白血病发病机制和治疗方法已成为热门课题。立题依据（二）SHP-1基因定位及编码蛋白人类SHP-1基因定位于染色体12p13，由17个外显子组成。表达分子量为68kD的蛋白质，该蛋白为一种非受体蛋白酪氨酸磷酸酶，包括2个酪氨酸同源体结构域(SH2)：一个催化结构域和一个多种氨基端或羧基端延伸区，SHP-1首先在人乳腺癌细胞中发现，并证实主要在造血细胞中表达，上皮细胞也有少量表达。立题依据（三）SHP1磷酸酶负向调节细胞转导酪氨酸磷酸化受蛋白酪氨酸磷激酶（PTK）和蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）调节，前者催化酪氨酸磷酸化，后者使其脱磷酸化。SHP-1是PTP家族重要成员，可通过直接去磷酸化作用对酪氨酸激酶受体（RTKs）、细胞因子及生长因子受体和抗原受体复合物三大信号通路进行负调控,抑制细胞的有丝分裂、增殖、分化和生物活性。也可通过SH2结构域与CD22，CD72等抑制性受体偶联，使下游信号蛋白脱磷酸化而终止、消弱细胞生长信号或激活凋亡信号。立题依据（三）SHP1磷酸酶负向调节细胞转导立题依据（四）SHP-1基因与肿瘤SHP-1基因是一个抑癌基因,在乳腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、直肠癌、胃贲门腺癌、前列腺癌中表达率明显低于癌旁组织。对疾病的发生和预后的判断具有重要的意义,SHP-1基因作为一个靶向基因有可能为肿瘤的治疗提供一条新途径.立题依据（四）SHP1基因与肿瘤不同类型的白血病通常有特殊的表观遗传学变化。SHP-1抑癌基因沉默在肿瘤方面的作用已经得到重视，但在不同类型白血病中表现差异方面却研究甚少，2009年Kyung-OkUhm等首次提及SHP-1基因的甲基化在AML的发展过程可能扮演重要角色,国内尚无此类研究。研究目标及内容本实验旨在通过对急性与慢性髓系白血病患者的SHP-1启动子DNA甲基化状态、SHP-1基因mRNA表达及SHP-1蛋白表达的测定，探讨SHP-1基因启动子区域异常甲基化与白血病发生、发展、疗效及预后之间的关系。阐明SHP-1基因在白血病形成中的作用及可能的机制，为进一步探索白血病发生的病理机制、开发新的靶向治疗提供理论依据。研究方法及技术路线提取单个核细胞MSP法检测白血病细胞SHP1基因DNA启动子甲基化RT-PCR法检测白血病细胞SHP1基因的mRNA表达免疫组化检测白血病细胞SHP1蛋白的表达RT-PCR白血病患者对照组研究方法及技术路线1.研究对象实验组：2012年7月至2013年1月于本溪市中心医院血液内科门诊或病房诊断急性白血病的病例。急性白血病：1、急性髓系白血病2、慢性髓系白血病A.初治组;B.完全缓解组;C复发组每组20个病例对照组:同期本溪市中心医院血液内科非白血病患者（如缺铁性贫血等）研究方法及技术路线2.抽样方法：非随机抽样3.标本采集骨髓穿刺涂片检查时，同时取骨髓及静脉血各2ml，用EDTA抗凝，应用淋巴细胞密度梯度离心法分离单个核细胞，细胞沉淀，80℃保存。研究方法及技术路线4.资料收集对符合入选标准的研究对象讲解本次实验的目的和意义，征得知情同意后，进行病史调查和标本采集。研究方法及技术路线实验研究方法主要实验仪器：ABI9500PCR扩增仪、9700PCR扩增仪、垂直电泳槽、电泳仪、化学发光凝胶成像、低温高速离心机、4℃低温冰箱、-80℃超低温冰箱、光学显微镜、微量移液器、常温台式离心机、电热恒温水浴箱、紫外分光光度仪研究方法及技术路线实验研究方法主要试剂：琼脂糖、Tris碱、氯仿、异丙醇、无水乙醇PCR引物、DEPC、TrizolReagent、DNAladder逆转录试剂盒、淋巴细胞分离液、PCR扩增试剂盒研究方法及技术路线试验方法1、外周血单个核细胞悬液的制备2、TRIZOL法提取细胞总RNA3、总RNA的鉴定4、cDNA的合成5、PCR反应6、PCR产物分析7、PCR阳性、...
