Western Blotting 本 次 试 验 的 目 的 是 使 同 学 们 掌 握 Western Blotting 法 鉴 定 目 标 蛋 白 的 原 理 和熟 悉 Western Blotting 的 方 法 ， 并 了 解 抗 原 抗 体 结 合 反 应 的 影 响 因 素 。 Western Blotting 的 blotting 译为印迹法 ， 是 指将样品转移到固相载体上， 而后利用相应 的 探测反 应 来检测样品的 一种方 法 。1975 年， Southern 建立了 将 DNA 转移到硝酸纤维素 膜（NC 膜）上， 并 利用 DNA－RNA 杂交检测特定 的 DNA 片段的 方 法 ， 称为 Southern 印迹法 。而后人们 用类似的 方 法 ， 对RNA 和 蛋 白 质进行印迹分析， 对 RNA 的 印迹分析称为 Northern 印迹法 ， 对单向电泳后的 蛋 白 质分子的 印迹分析称为 Western 印迹法 ， 对双向电泳后蛋 白质分子的 印迹分析称为 Eastern 印迹法 。 Western 既可以定 性， 又可以半定 量， 是 初步鉴 定 蛋 白 质最方 便也是 最通用的 方 法 。它通常分为两种方 法 ： Western Blotting 方 法 一: 直接法 方 法 二: 间接法 优点： 1.快速（一种抗 体 ） 2.没有二抗 交叉反 应 引起的 非特异性条带 1. 免特异性不受标 记影响 2. 信号放大灵敏度高（多个二抗 结 合 位点） 3. 多种标 记的 二抗 可供选择 4. 可 选 择 不 同 的 Marker 缺 点 ： 1.免 疫 反 应 性 降 低 2.无 信 号 二 级 放 大 3.抗 体 标 记 费 时 昂 贵 ,使用 不 方 便 1. 交 叉 反 应 引 起 的 非 特异 性 条 带 2. 额 外 的 二 抗 孵 育 以 及条 件 优 化 同 时 Western 又 具 有 多 种 识 别 蛋 白 质 的 显 色 方 法 ，主 要 有 以 下 几 种 ：i. 放射 自 显 影 ii. 底 物 化 学 发 光 ECL iii. 底 物 荧 光 ECF iv. 底 物DAB 呈 色 现 常用 的 有 底 物 化 学 发 光ECL 和 底 物 DAB 呈 色 。 一 、实验原理 Western Blotting（蛋 白 质 免 疫 印迹法 ）是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳奋力的 蛋 白 质 样品， 转移到固相载体 （例如硝酸纤维素薄膜）上， 固相载体 以 非 共价键 形 式 吸 附 蛋 白 质 ， 且 能 保 持 电泳分 离 的 多 肽 ...
