多重置换扩增应用于肿瘤研究及临床的新进展-滴滴顺风车最新进展

下载后可任意编辑多重置换扩增应用于肿瘤讨论及临床的新进展|滴滴顺风车最新进展多重置换扩增应用于肿瘤讨论及临床的新进展|滴滴顺风车最新进展 【摘要】 多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)作为一种新近的全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)技术,能高效地获得均衡、稳定的大量 DNA 产物,从而满足多种讨论对大量 DNA 的需求。因此MDA 可用于处理有限的临床样本的基因组 DNA,在肿瘤学的标志基因定位、杂合性缺失及临床诊断等方面得到应用。 【关键词】 全基因组扩增;多重置换扩增;肿瘤 1 多重置换扩增原理及特点 多重置换扩增已被证明既可应用于环状 DNA 模板扩增[4]也可被用于线性DNA 模板[1]。多重转换扩增是一种非 PCR,等温不需要经过热循环的基因扩增技术。使用独特的 Phi 29 DNA 聚合酶,对于模板有很强的模板结合能力,能连续扩增 100 kb 的 DNA 模板而不从模板上解离,平均片段长度>10 kb[2]。 多重置换扩增具有能直接分离样本和纯化样本均适用[3]、产量高且有长度保证[4]和无位点扩增误差等特点[5],保证了扩增产物的质量。 2 多重置换扩增应用于肿瘤讨论及临床应用 多重置换扩增最先被应用于人类全基因组扩增[6],此后被更多地应用于真核细胞的讨论,包括基因组测序和人类及灵长类的基因分型[7]、法医学中对低拷贝数 DNA 检验和混合斑中精子 DNA 扩增进行 STR 分型[8]等。以下将对多重置换扩增的肿瘤讨论及临床的最新应用进展作详细说明。 2.1 肿瘤基因组学讨论 MDA 对于基因组或基因片段的均衡高效扩增用于癌症基因组学讨论非常合适。因为为克服癌症细胞异质性,使实验结果准确可靠,常利用显微切割技术特异地选择靶细胞,所以获得的细胞数量有限。利用 MDA 对其进行扩增,即可得到足量 DNA 产物,从而满足基因组学高能量分析折需要。目前应用激光捕获显微切割(laser capture Microdissection,LCM)、MDA 和微阵1下载后可任意编辑列比较基因组杂交(array-comparative genomic hybridization,aCGH)三项技术联合应用于癌症基因组学的讨论。如讨论前列腺癌的染色体变化,致力于发现早期前列腺癌[10];家族性胰腺癌及其癌前病变的全基因组等位基因的测定[11]; 国 内 亦 有 对 于 胃 癌 [12] 、 贲 门 癌 [13] 的 杂 合 性 丢 失 (1oss of heterozygosity,LOH)和抑癌基因的讨论。 2.2 肿瘤流行病学讨论 多重置换扩增可直接从全血、口腔细胞...