蛋白基因产物9

下载后可任意编辑蛋白基因产物 9.5 和泛素在 IgA 肾病中的表达 基因表达产物蛋白基因产物 9.5 和泛素在 IgA 肾病中的表达 基因表达产物 【摘要】 目的 观察蛋白基因产物 9.5(PGP 9.5)和泛素(ubiquitin)在IgA 肾病(IgAN)患者肾组织的表达及其与临床病理的关系,探讨其在 IgAN 病变的作用。方法 53 例 IgAN 患者分为单纯血尿组(A 组)及混合蛋白尿、血尿组(B 组)，免疫组织化学和免疫双染色法观察 PGP 9.5 和泛素在 IgAN 肾组织中的表达。结果 免疫组织化学显示在 IgAN 肾组织中，PGP 9.5 和泛素均有表达，主要在上皮细胞(壁上皮细胞、特别是小管上皮细胞)及新月体表达。免疫组化双染色显示：泛素分布更广泛，PGP 9.5 表达比泛素表达稍强，按 Lee 氏分级的级别增加逐渐增高，免疫组织化学半定量评分显示增生肥厚病变部位及新月体表达明显强于正常和纤维化/萎缩的部位(P0.05)。 1.2 病理损害分级标准 IgAN 肾脏病变损害程度组织学分级采纳 Lee［1］修改的 Meadow 组织学分级标准。Ⅰ级：基本正常，偶见轻度系膜增宽伴有或不伴有系膜细胞增多，无肾小管间质损害；Ⅱ级：50%的肾小球有新月体形成，肾小管及间质损害较Ⅳ级更为严重。肾小管、肾间质及血管病变的各项病变参数，采纳 Katafuchi 等［2］的半定量标准。肾小管、肾间质及血管病变积分 0~12分，包括间质炎细胞浸润、间质纤维化、肾小管萎缩、血管壁增厚或透明变性；积分评定分别是：无，0 分；51%，3 分。 1.3 标本处理 全部标本经 4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切 4 mm 厚切片，常规行 PAS、HE、PASE 及 Masson 染色.常规光镜下观察。 1.3.1 免疫组织化学检查 石蜡切片常规脱蜡水化后，10%正常山羊血清封闭。用 1：100 稀释的多克隆小鼠抗人 PGP 9.5 抗体(Chemicon 公司)，1：100单克隆小鼠抗人泛素抗体(Chemicon 公司) 37℃孵育，生物素偶联的羊抗鼠或兔抗羊工作液 37℃ 孵育，辣根过氧化物酶偶联的链霉卵白素 37℃ 孵育，以 DAB 和双氧水室温发色 8 min。以 PBS 液替代一抗为阴性对比。免疫组化双染色按试剂盒进行(Dako 公司)。 1下载后可任意编辑 1.3.2 肾组织 PGP 9.5 和泛素免疫组化表达半定量分析方法 根据染色强度分为 0~3 级，0 级为阴性，1 级为淡黄色，2 级为棕黄色，3 级为棕褐色；根据染色面积分为 0~3 级，0 级为无染色，1 级染色面积 50%。计算强度与面积积分的乘积进行分...