包 涵 体 的 纯 化 和 复 性 总 结 二 、 包 涵 体 的 洗 涤 1、 包 涵 体 的 洗 涤 问 题 通 常 的 洗 涤 方 法 一 般 是 洗 不 干 净 的 ， 我 以 前 是 这 么 做 的 ， 先 把 包 涵 体 用 6M 盐 酸 胍 溶 解充 分 ， 过 滤 除 去 未 溶 解 的 物 质 ， 注 意 留 样 跑 电 泳 ， 然 后 用 水 稀 释 到 4M,离 心 把 沉 淀 和 上清 分 别 跑 电 泳 ， 如 此 类 推 可 以 一 直 稀 释 到 合 适 的 浓 度 ， 你 可 以 找 到 一 个 合 适 去 除 杂 质 的办 法 ， 其 实 这 就 是 梯 度 沉 淀 的 方 法 ， 我 觉 得 比 通 常 的 直 接 洗 脱 效 果 好 。 包 涵 体 一 般 难 溶 解 ， 所 以 你 要 注 意 未 溶 解 的 部 分 ， 你 可 以 跑 电 泳 对 比 ， 因 为 有 时 候 难 溶解 的 就 是 你 的 目 标 蛋 白 ， 所 以 每 次 处 理 都 要 把 上 清 和 沉 淀 跑 电 泳 对 比 ， 免 得 把 目 标 蛋 白弄 丢 了 。 此 外 刚 处 理 完 的 包 涵 体 好 溶 解 。 冷 冻 后 难 溶 解 ， 溶 解 也 需要 长点时 间， 也 需要 大量的 溶剂。 如 果 说是 不 少不 溶 解 的 不 是 你 要 的 ， 那就 不 用 管了 。 2、 如 何得 到 比 较纯 的 包 涵 体 对 于包 涵 体 的 纯 化 ， 包 涵 体 的 前 处 理 是 很重要 的 。 包 涵 体 中主要 含有 重组蛋 白 ,但也 含有 一 些细菌成分 ,如 一 些外 膜蛋 白 、 质 粒ＤＮＡ和 其它杂 质 。 洗 涤 常 用 1%以 下的 中性 去 垢剂， 如 Tween、 Triton、 Lubel 和 NP40 等加EDTA和 还原剂2-巯基苏糖醇（DTT）、 β-巯基乙醇等反复 多次 进行， 因 去 垢剂洗 涤 能力随溶液离 子强度 升高而加强， 在洗 涤 包 涵 体 时 可 加50 mM NaCL。 这 样 提取的 包 涵 体 纯 度 至少可 达 50%以 上 ， 而且可 保持元结 构。 也 可 用 低浓 度 的 盐 酸 胍 或尿素/中性 去 垢剂/EDTA/还原剂等洗 去 包 涵 体 表面吸附的 大部 分 不 溶 性 杂 蛋 白 。 洗 涤 液 pH 以 与工程菌...
