下载后可任意编辑噬菌体展示技术解析噬菌体展示技术经过近 20 年的进展和完善, 已被广泛应用于抗原抗体库的建立、 药物设计、 疫苗讨论、 病原检测、 基因治疗、 抗原表位讨论及细胞信号转导讨论等。噬菌体展示系统模拟了自然免疫系统, 使我们有可能模拟体内抗体生成过程, 构建高亲和力抗体库。由于噬菌体展示技术实现了基因型和表型的有效转换, 使讨论者在基因分子克隆基础上实现了蛋白质构象体外控制, 从而为猎取具有良好生物学活性的表示产物提供了强有力手段。另外, 噬菌体展示技术已成为不经过免疫猎取特异性人源抗体的新途径, 为猎取对人类和动物疾病有诊断和治疗价值的单克隆抗体提供了重要手段。应用面这么高大上, 那么原理到底是什么呢? 那接下来将由我为您揭开其神奇的面纱! 一、 噬菌体展示技术的原理噬菌体展示技术( phage display) 是将多肽或蛋白质的编码基因插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置, 在阅读框正确且不影响其它外壳蛋白正常功能的情况下, 使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表示, 融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。展示到噬菌体表面的多肽或蛋白保持相对独立的空间结构和生物活性, 能够与靶分子结合和识别。噬菌体展示的肽库或蛋白库与固相抗原结合, 洗去未结合的噬菌体, 然后用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体, 中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增, 经过 3-5 轮的富集, 逐步提高能够特异性识别靶分子的噬菌体比例, 最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。下图粗略展示了技术筛选的过程: 下载后可任意编辑二、 噬菌体展示系统的分类1.M13 噬菌体展示系统M13 噬菌体属于单链环状 DNA 病毒, 其基因组为 6.4 kb, 编码 10 种蛋白, 其中 5 种为结构蛋白, 包括主要衣壳蛋白的 PⅧ 和次要衣壳的 pⅢ 、 pⅥ 、 PⅦ 和 PⅨ 。其中, pⅢ 和 PⅧ 是噬菌体展示中最常见的两种蛋白, 构建了pⅢ 和 PⅧ 展示系统。pⅢ 蛋白分子量为 42 kDa, 分布在噬菌体颗粒的一端。一般一个噬菌体有 3-5 个拷贝的 pⅢ 蛋白, 可在 N 端的柔性连接区插入外源蛋白或者多肽。pⅢ 系统的主要优点是对展示的外源蛋白大小无严格的要求, 该系统能够用来展示分子量较大的蛋白。PⅧ 蛋白的分子量为 5.2 kDa, 主要分布在噬菌体颗粒的两侧。由于该蛋白的分子量很小, 只适合用来展示外源短肽。外源肽段的太大会影响病毒包装, 不能形成有功能的噬菌体。但...
