生化试验-蛋白定量分析试验报告

精选蛋白定量分析实验实验一双缩脲法测定蛋白质含量一．实验目的掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和标准曲线的绘制。二．实验原理在碱性溶液中，具有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）可与Cu2+结合生成紫色化合物（双缩脲反应） ，颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用比色法测定蛋白质的浓度。 在一定条件下， 未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于 520nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。三．实验仪器及试剂容量瓶、试管、试管架、恒温水浴槽、吸量管、分光光度计、比色皿试剂：①标准酪蛋白溶液10mg/ml ②双缩脲试剂 : 溶解 2.5g CuSO4· 5H2O于 100ml 水中，加热溶解，取酒石酸钠 10g、碘化钾 5g，溶于 500ml 水中，再加 5mol/L NaOH溶液 300ml 混合，倒入硫酸铜溶液，加水至1000ml ③小鼠肝脏蛋白原浆四．实验内容（1）取小试管 7 支，编号，按下表注入溶液（2）混匀后，于 37℃水浴中保温 15min，在 520nm波长下比色，以第6 管调零点，测得各管的吸光度值为纵坐标，蛋白质的克数为横坐标，绘成曲线。（3）按表中第七管的数据加入溶液，在37℃水浴中放置 15min，测其吸光度，根据吸光度值查标准曲线即得出每100ml 小鼠肝脏蛋白原浆溶液中蛋白质的克数。五. 实验数据记录及结果分析绘制曲线如下：试剂（ ml）管号1 2 3 4 5 6 7 标准蛋白质溶液0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 —原浆 0.1 生理盐水0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 1.0 0.9 双缩脲试剂4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 管号1 2 3 4 5 7 吸光度0.069 0.238 0.390 0.528 0.659 0.107 精选由图可知，当吸光度为 0.107 时，相对应的蛋白质克数为1.38 mg，则 100ml小鼠肝脏蛋白原浆液中蛋白质克数为1.38 g 。实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量一．实验目的掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法；熟悉紫外分光光度计的使用。二．实验原理考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在一定蛋白质浓度范围内，结合物在595 nm 波长下有最大吸收峰，测其光的吸收量即可得结合蛋白质的量。三．实验仪器及试剂仪器：分光光度计，试管，吸量管，比色皿试剂：①考马斯亮蓝试剂 : 考马斯亮蓝 G-250 100mg溶于 50 ml 95%乙醇中，加入 100ml 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 ml 。②标准蛋白溶液 500μ g/ml③50 倍稀释后的小鼠肝脏蛋白原浆四．...