产前诊断实验室技术VIP免费

1产前诊断实验室技术郑州大学第三临床医学院检验科吴玥丽2015年11月2主要内容一、产前诊断基本知识介绍二、产前诊断的取材三、产前诊断主要实验室技术羊水细胞染体核型分析羊水细胞荧光原位杂交3为什么要进行产前诊断围生儿期常见疾病的发生率大大降低遗传性疾病的发生率逐年提高遗传病不能根治，不少遗传病病情严重，甚至导致患儿死亡或终生残疾产前诊断可及时诊断遗传性疾病，有利于积极采取预防措施，减少遗传病患儿的出生，降低遗传性疾病的发生率4产前诊断概念产前诊断又称宫内诊断，是在胎儿出生前即对其是否患有某种遗传性疾病或先天畸形做出准确判断产前诊断无创性产前诊断技术有创性产前诊断技术5产前诊断概念无创性产前诊断技术•影像学检查（X线、超声、胎儿镜等），了解胎儿大体形态的发育情况•母体外周血富集胎儿细胞技术•母体外周血胎儿游离DNA检测有创性产前诊断技术（介入性产前诊断技术）•绒毛膜穿刺、羊膜腔穿刺、脐带穿刺术等有创性操作•获得胎儿细胞进行遗传学分析，判断胎儿是否患有遗传性疾病6可进行产前诊断的疾病有哪些单基因遗传病:PCR，基因测序等遗传病染色体病：染色体核型分析——金标准！荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization,FISH）多基因遗传病：疾病易感基因研究基因组病：SNP-array,array-CGH7染色体异常的发生机率活产婴儿0.6%•先天性智力障碍（MR）患者23%•先天性心脏病13%死胎和围产期死亡胎儿6.0%自然流产(前三个月)60%8染色体异常的发生机率21-三体综合征新生儿发病率高达1/80018-三体发病率约为1/800013-三体发病率约为1/20000其它各种性染色体异常发病率约为1/10009哪些人需要进行产前诊断唐筛高风险孕妇35岁以上高龄孕妇夫妇任一方为染色体病或染色体平衡易位携带者曾生育过染色体异常患儿的夫妇再次妊娠曾有不明原因自然流产、畸胎、死胎、死产或新生儿死亡史的孕妇再次妊娠采用辅助生殖技术妊娠者夫妇一方有明显致畸因素接触史者10孕期胎儿染色体筛查方案11唐氏筛查报告的解读例如：21-三体风险率1/100假阳性和假阴性•结合母亲年龄的三联筛查，唐氏综合症检出率:≈65%，假阳性率：4.5-5.0%•增加抑制素A，可以将检出率增加到75%•结合母亲年龄的NT测量，21三体检出率：77%，假阳性率：5%•结合生化分析和颈透明度的唐氏综合症的检测检出率可以达到89%，假阳性率：5%仅仅是筛查实验，不是确诊实验！12先天愚型的发生率与母亲年龄关系母亲生育年龄（岁）出生先天愚型患儿风险率曾生育过先天愚型患儿孕妇再发风险＜201/1850增加5倍即1/37020-251/1600增加5倍即1/32025-301/1350增加5倍即1/27030-351/800增加5倍即1/16035-401/260无明显增加40-451/100无明显增加＞451/50无明显增加13产前诊断取材绒毛膜穿刺术羊膜腔穿刺脐静脉穿刺术14绒毛膜穿刺术在妊娠9-11周之间进行一次绒毛活检获取20mg左右的绒毛组织可满足任何产前诊断的需要操作相关的流产率约为1%15羊膜腔穿刺术孕18-24周B超引导下取羊水25-30ml16脐静脉穿刺术操作时间窗为18周至分娩，妊娠20-24周为最佳穿刺时期其危险性高于羊膜腔穿刺术和CVS17产前诊断主要实验室技术羊水细胞培养及染色体核型分析羊水细胞荧光原位杂交检测（Fluorescenceinsituhybridization，FISH）18羊水细胞培养及染色体核型分析19羊水细胞培养实验原理标本采集：一般为孕18～24周，此时羊水中所含成纤维细胞和上皮样细胞多，较易生长羊水细胞是胎儿皮肤等的脱落细胞，大部分是固缩的，死亡的，只有一小部分是活细胞人的羊水细胞能长成单层贴壁细胞克隆并可连续进行传代培养20羊水细胞培养实验原理培养条件：37℃,5%CO2开放式培养经过7天左右的培养，羊水细胞可生长为较成熟的细胞克隆，此时需更换培养液换液后细胞进入指数增长期，此时细胞生长旺盛，在换液后d1天及d2天在倒置显微镜下观察克隆生长情况，适时加入秋水仙素终止培养21羊水细胞培养实验步骤25ml羊水于1500rpm离心10min小心弃上清后，用1ml羊水重悬沉淀加入5ml完全羊水培养基，混匀转入培养瓶中，拧松瓶盖，置于37℃,5%CO2培养...