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TLC薄层层析技术Thin-LayerChromatography2一、一、TLCTLC简介简介二、操作过程二、操作过程三、扩展及用途三、扩展及用途四、问题讨论四、问题讨论主要内容：主要内容：背景：薄层色谱法(Thin-LayerChromatography,简称TLC）是Kirchner等人在五十年代从经典柱色谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种色谱技术。六十年代后，Stahl等人对薄层色谱法的标准化、规格化及扩大应用等方面进行了许多工作，使该法日趋成熟。2010年版中国药典一部有3341项鉴别采用TLC法分类：按薄层色谱使用的固定相的性质及其分离机制可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层及分子排阻薄层背景和分类4原理:利用吸附剂(硅胶)对样品中各组分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各组分达到分离的目的。特点：微量、快速、简单、节省一般认为TLC是一种定性和半定量的方法原理和特点5操作过程氧化铝有弱碱性pH=9、酸性pH=4及中性pH=7.5三种氧化铝。弱碱性氧化铝用来分离中性或碱性化合物；中性氧化铝适用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合物可用酸性氧化铝分离。硅藻土、纤维素、葡聚糖凝胶等化学键合固定相（C18、C8等）薄层板硅胶表面带硅醇基（－Si－OH），呈弱酸性(pH=4.5)，活性硅胶适合分离酸性或中性化合物，如酚类、有机酸、醛类、甾体化合物以及氨基酸类，是基于吸附作用；非活性硅胶含有一定的水，在分离色素时是基于分配作用。硅胶G:是含有13％煅石膏（gypsum）黏合剂的硅胶硅胶H：不含黏合剂的硅胶硅胶HF254：不含黏合剂，含有一种无机荧光剂（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光硅胶GF254：含有煅石膏黏合剂，含荧光剂，在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光硅胶HF254+366：不含粘合剂，在254与366nm波长有荧光硅胶PF254：制备型的，在254nm有荧光（有荧光剂，适用于不发光不易显色物质的制备与分离）市售预制板规格将吸附剂或载体均匀涂布在玻璃板、塑料片或铝箔上的预制板。薄层有软板及硬板两种。硬板系在吸附剂中加入适量粘合剂后用湿法涂层，粘合剂的加入可以增加薄层的强度。常用的粘合剂为羧甲基纤维素钠(CMCNa)或煅石膏(CaSO41/2H2O)使用前一般应于110℃下活化30min薄层厚度约为0.2-0.3mm。制备板0.5-2mm。薄层的制备手动点样：灵活方便，常用于各种TLC鉴别中。自动点样重现性和准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。半自动点样仪点样量：原点位置的负荷有限，体积0.5～10微升，浓度通常为0.5～2mg。直径3mm以内样品溶剂：原则上应选择对可以溶解但溶解度不是很大的溶剂一定要有交叉点点样Spyringe10点一遍点二遍点三遍Note:a.a.点样的浓度要控制适当；点样的浓度要控制适当；b.b.点的斑点较小，展开的点的斑点较小，展开的TLCTLC分离度好分离度好c.0.3mmc.0.3mm毛细点有机相，毛细点有机相，0.5mm0.5mm点水相。点水相。毛细管取样1cm？3.14*（0.3mm/2）²*10mm=1.413mm³=0.71μL3.14*（0.5mm/2）²*10mm=3.925mm³=1.96μL点样常见问题1、点样量太多。展开剂不能全部负载2、太浓了。展开剂从原点外围绕行3、浓。未分开4、样品溶剂残留。吹干时应注意高温破坏样品5、点样量太少。看不清6、样品溶剂中溶解度很大。原点将变成空心圆123456712一般极性溶剂体系(CH2Cl2,THF,ethylacetate,etc)强极性溶剂体系(DMSO,DMF)需要淬灭的体系(NaH,LiAlH4,n-BuLi,etc)强碱、酸性物质(NaOH,H2SO4,etc)一般不推荐直接取样，建议淬灭后简单后处理再取样，或稀释后取样。最好简单后处理（加水和有机溶剂萃取）以后取样处理（如加水或酸和有机溶剂）后取样最好中和后取样Note:a.a.产品在水相产品在水相oror有机相；有机相；b.b.有无没溶解的固体。有无没溶解的固体。反应液的取样反应液的取样：展开方法展开剂浸入薄层下端高度不应超过0.5cm，当心将样品带被展开剂浸泡硬板可以进行近水平、上行、下行、双向、多次展开等展开槽有直立式、平卧式、双槽式、夹心式或水平式Note：a.展开槽应密闭。溶剂蒸气、液相(展开剂)、固定相(吸附剂)一起构成复杂的三维层析过程b.展缸预先饱和以减弱边缘效应，如果薄层板也同时预饱和效果更佳。c.点样带宽时（常见制备...