胃癌标本的正确固定许斌主要内容标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题主要内容标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题固定的意义固定是组织制片的基础及关键步骤,固定是否及时、彻底,影响着整个制片过程。是标本处理过程的一个主要环节。固定目的1、保持组织形态学特征清晰和稳定2、阻止组织、细胞自溶与腐败3、凝固或沉淀组织细胞内物质4、保存组织细胞抗原性5、使组织保持一定的硬度和弹性KhouryT,etal.ModPathol2009;22:1457-1467.延迟固定导致激素受体染色减弱固定延迟时间01234567平均Q值0min10min30min1h2h4h8hERPRER、PR的平均Q值随固定延迟时间的增加而下降ER染色减弱的标本比例(n=58)(n=39)离体至固定时间P=0.03LiXX,etal.ModPathol2013;26,71-78.延迟固定导致激素受体染色减弱延迟2h以上时间固定,出现染色减弱的比例升高+,无减弱;任一字母代表减弱,A:因细胞轮廓模糊,B:因非一致性信号;C:因核分辨不清病例编号0min10min30min1h2h4h8h过夜总的荧光减弱例数1++++A,CCA,CA,C42++++A,B,CA,B,CA,B,CA,B,C43+++++CCC34+++CCCCC55+++CB,CB,CB,CB,C56+++++CCC37++++A,BA,BA,BA,B48+++A,BA,BA,BA,BA,B59++++++++010++++++A,BA,B2总的荧光减弱例数+++3689935HER2荧光原位杂交检测结果与固定延迟时间的关系KhouryT,etal.ModPathol2009;22:1457-1467.延迟固定导致HER2染色改变延迟1h之后,FISH染色开始减弱;2h之后,统计学上有显著性差异(P<0.05)编号0min10min30min1h2h4h8h过夜1否否否否否否是是2否否否否否否否是3否否否否否否否是4否否否否否是是是5否否否否否是是是6否否否否是是是是7否否否否是是是是8否否否否否否是是9否否否否否是是是10否否否否否否否是总的受累例数00002578KhouryT,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol2012;20:531-542.总体组织形态学改变情况延迟固定导致组织形态学改变延迟固定2h标本开始出现明显的组织形态学改变,延迟固定8h和过夜的标本发生组织形态学改变的几率最高0min10min30min1h2h4h8hONE-cadherin230230230230208204204204EGFR202020203311与延迟固定时间相关的膜标志物的表达(中位值)ON:过夜延迟固定导致EGFR和E-cadherin表达改变KhouryT,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol2012;20:531-542.EGFR和E-cadherin表达水平自延迟固定2h起开始下降延迟固定时间190195200205210215220225230235ON8h4h2h1H30min10min0scoreE-cadherin染色评分随延迟固定时间的变化延迟固定导致Ki-67表达改变弥漫性染色病例所有病例延迟固定时间延迟固定对Ki-67的影响050100150200250ON8h4h2h1h30min10min0minKi-67表达水平在延迟固定4h和8h出现下降KhouryT,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol2012;20:531-542.手术切除标本的有丝分裂象较活检标本平均高出3倍多(20±6vs6±2有丝分裂/10个高倍视野,P=0.008);而两者间MIB-1免疫染色的肿瘤细胞比例则相当有丝分裂象计数采用MIB-1免疫组化检测评估乳腺癌的增殖指数活检标本手术切除标本有丝分裂/10HPF活检标本手术切除标本MIB-1(占肿瘤细胞的比例)LehrHA,etal.ModernPathology2012:1-7.延迟固定导致肿瘤生物学特点改变手术切除标本有丝分裂象增加源自固定延迟:活检标本自离体至固定的时间为15~30min,而手术切除标本则需数个小时主要内容标本及时固定对生物标志物检测的重要性胃癌手术标本固定的实践问题手术标本及时固定的时间•SEOM/SEAP胃癌HER2检测共识1–手术标本应在切除后30min内固定•中国胃癌HER2检测指南2–规范的标本固定是HER2检测质量的保障,能使组织形态保存良好,防止细胞内蛋白和核酸的降解–所有标本应在离体后20~30min内进行标记、切开、固定等初步处理•WernerM,etal3–标本应在手术切除后30min内尽快地固定,器官和实体瘤应予以切开以确保固定液快速渗透1.Gómez-MartínC,etal.ClinTranslOncol2011;13:636-651.2.《胃癌HER2检测指南》编写组.ChinJPathol2011;40:553-557.3.WernerM,etal.AmJSurgPathol2000;24(7):1016-1019.SEOM/SEAP:西班牙内科肿瘤学会和西班牙病理学家学会据报道约20%的进展期胃癌有HER2过表达...