牙菌斑唾液和龈沟液的采集和处置VIP免费

牙菌斑、唾液和龈沟液的采集和处理二次细菌定植（Secondarybacteriacolonization)先锋菌pioneer定植colonize环境改变(environmentchanges)个体(individual)生物体的社会群体(community)极期群落(climaxcommunity)一、菌斑的采集二、唾液的收集三、龈沟液的采集和处理四、标本运送五、标本的分散和稀释一、菌斑的采集1、牙合面沟裂和邻面菌斑的采集2、根面菌斑的采集3、龈上或龈缘菌斑的采集4、龈下菌斑的采集S.mutans与龋病关系密切，但数量<2%初期链球菌唾液中某种微生物浓度与附着量呈正相关第一个细胞附着至牙面所需细菌浓度S.mutans104~105/mlsalivaS.sanguis103/ml1、合面沟裂和邻面菌斑的采集漱口去除口内食物残渣隔湿小挖匙或探针采集牙线或正畸用的细钢丝采集邻面菌斑标本隔湿探针采集2、根面菌斑的采集3、龈上或龈缘菌斑的采集漱口隔湿显色无菌匙形器采集4、龈下菌斑的采集带有充气导管的采集器可卸式取菌器纸尖刮除龈上菌斑后漱口，棉卷隔湿，将灭菌纸尖直接插如龈沟或牙周袋内，停留10s取出，放预还原传送培养基中。匙形器刺激唾液非刺激唾液二、唾液的收集最佳采集时间：晨起后，刷牙洗漱前或两餐之间漱口吐唾法唾液收集器三、龈沟液的采集和处理选用Whatman3号滤纸剪成210mm纸片刮除龈上菌斑漱口隔湿沟内法：滤纸前端轻插入龈沟入口处，当感到阻力时再向龈沟深部插入，约30s后取出，放入传送液中。沟外法：滤纸片紧贴于牙面、龈缘、附着龈上，使龈沟液慢慢渗至纸上1.滤纸吸着法①龈沟内采集法②牙周袋内采集法龈沟或牙周袋的龈下菌斑采集法2.毛细管法将细的毛细管置于龈沟口处，凭毛吸作用将龈沟液吸入管内四、标本运送1ml的硫乙醇盐（硫乙醇酸钠0.15g，磷酸氢二钠0.11g，氯化钠0.5g，加三蒸水100ml，加热溶解，冷却到50度，加新鲜配制的1％Cacl20.9ml，高压灭菌）收集好菌斑后用0.5ml无菌石蜡加盖五、标本的分散和稀释超声震荡（可加玻璃珠）1.分散十倍系列稀释法菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。2稀释全平板CFU=每平方厘米平均菌落数×πr2（平均面积）1ml标本中活菌数=全平板CFU×稀释倍数如果两个相邻稀释度菌落平均数均在30~300之间，则计数其比值：比值＜2，报告两个稀释度的平均菌落数；比值≥2，报告两个稀释度中较大的菌落数。如果只有一个稀释度的平均菌落数在30~300之间，则以该平均菌落数乘以稀释倍数报告。如果稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。如果所有稀释度均未见菌落，则报告小于10，而不报告0。实验步骤1.采集龈上菌斑2.分散标本3.十倍系列稀释4.涂平皿实验方法：漱口、隔湿→刮取牙面菌斑立即置转送液中密闭震荡、分散菌斑团块涂片接种和培养次代培养生化鉴定菌斑采集和处理染色观察分类革兰染色涂片观察、细菌表型鉴定革兰染色步骤：细菌涂片加热固定加革兰（碱性结晶紫）甲液、乙液各一滴，混匀后初染30秒革兰碘液媒染30秒丙酮-乙醇混合脱色剂脱色5～10秒石炭酸复红复染5秒干燥后1000倍显微镜油镜下观察水洗水洗水洗水洗表型鉴定——（1）菌落特征观察初代培养的菌落观察要点：形态：如水滴状、圆形、丝状、不规则状、根状、梭形等。大小：菌落直径一般以mm计，注意大小的一致性。厚薄：扁平、丘状、凸、半球状、瘤状(中央凸)。颜色：无色、白、黄、红、绿、黑或棕色。边缘：如整齐、锯齿状、波状等。透明度：透明、半透明、不透明。菌落型：光滑、粗糙、黏液样。溶血型：α、β、γ（限血平板）。实验结果及结果评价在5%～10%CO2、90%～95%的N2，或80%N2、10%CO2和10%H2的大气环境下37℃孵育48小时表型鉴定——（2）菌细胞形态和染色特征观察菌细胞形态：球形、杆形、球杆形、弯曲状、梭状、菌细胞末端形状、细胞内有无颗粒、肿胀等。革兰染色特征：阳性、阴性染色,染色均匀性。实验结果及结果评价生化鉴定：革兰染色鉴定次代培养为纯培养后，收集琼脂表面的菌苔，用PBS稀释成2×109/ml菌量取待测的细菌悬液100μl，加入10个反应...