四川大学实验报告题目： 植物基因组 DNA的提取与检测一、实验目的1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2. 掌握基因组 DNA提取的方法和步骤。二、实验原理1. 在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；2.SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来；3. 苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4. 上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，沉淀 DNA溶于 TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp 至近 50kb 的 DNA分子。 DNA的迁移率（ U）的对数与凝胶浓度（ T）之间存在反平行线性关系。因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。三、实验材料1. 设备移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml 离心管2. 材料植物幼嫩叶片3. 试剂（1）细胞提取液： 100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β - 巯基乙醇（去除酚类）（2）氯仿 : 异戊醇（ 24:1 ）（3）其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE 缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液四、方法和步骤1、取 500μ L 细胞提取液于 650C水浴（金属浴）中加热备用；2、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水冲洗干），去除叶脉，剪成细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；3、取 0.1g 粉末（大约两勺半）转移至500μ L 预热的细胞提取液中，迅速摇匀，650C水浴（金属浴）中保温30min，10min 左右温和颠倒混匀一次；第 1 页四川大学实验报告题目： 植物基因组 DNA的提取与检测4、从水浴（金属浴）中取出离心管，加等体积( 约 500μ L) 氯仿/ 异戊醇（ 24:1 ），室温下 10000rpm×10min；5. 将上清液转移到另一1.5mL 离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等2/3 体积的异丙醇，轻轻混匀，静置1min, 使核酸沉淀下来， 12000r/min × 5min ，倒掉上清液；6、加入 1ml 洗涤缓冲液， 轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，静置 5min,12000r/min× 2min, 去除上清液，再加入1ml 洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，放置 5min; 7、12000r/min × 10min 后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉...
