流式中参数的意义 前向角散射,即FSC 与细胞直径平方正相关(大小),所以我们平时上机的时候,有时用FSC 做阈值,排除碎片及其它颗粒,避免干扰。 侧向角散射,即SSC 是指与激光束正交90 度方向的散射信号,它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感,可以提供细胞内结构及颗粒性质的信息 FL2-A ,FL2-W 中A 和W 的含义 FL2-H1024,FL2-H256 中H 的含义,1024 和256 又代表什么呢。 名词“道数”是怎么定义的? w 好像代表脉冲宽度,但是脉冲宽度反映的是细胞什么特性呢? H-脉冲高度反映细胞什么特性呢? 好像你做的是细胞周期分析, 如果是,FL2-A 代表的是荧光峰面积,反映了细胞DNA 含量(前提是用Rnase 处理去掉了 RNA); FL2-W 代表的是荧光峰宽度,这个值可以区分单个细胞和双联体细胞; 下面的1024 和256 是定义数据文件大小的(记得培训时工程师这么说的) -H 好像没有什么特殊含义 ,就是指这个通道了, 一般检测那个通道的荧光就是选择哪个-H,比如 FSC-H,SSC-H,FL1-H 等等 流式涉及的调节参数太多了,主要的有: 1.电压 2.阈值 3.荧光补偿 4.通道选择:需要哪些通道、选择面积/高度/宽度、线性/Log 5.停止条件选择 太多太多了 FL2-A 代表FL2 AREA,FL2-H 即FL2 HEIGHT,通过这两个参数,可以将粘连体排除出去,因为粘连体跟多倍体有相同的FL2-A,但是FL2-H 远远大于正常细胞。 正确的设置是将 FL2-A 设置在 200 附近。当然,不设在 200 也可以,但是那样会对日后的分析造成困难。200 道是对周期分析最佳的参数。 FSC 是前向角散射,一般代表细胞的体积,值越大代表细胞越大。 SSC 是侧向角散射,一般代表细胞的颗粒度,值越大代表细胞的颗粒度越大,颗粒度指细胞表面的皱折度,细胞内亚细胞器、颗粒的数目等。 我初接触流式,很多东西都不是很清楚,查了园子里的资料也是一知半解的: 1.流式中FL1,FL2,FL3,FL4 分别是指的什么? 2.PI 单染观察细胞周期可以选其中的哪些呢?为什么? 3.如果 FL 选用不恰当,对结果会有影响吗?表现在那些方面呢? 我回答第一和第三个问题: 一,FL1,FL2,FL3,FL4 指的是第 1,第 2,第 3,第 4 个荧光,FL 是 fluorescence 荧光的意思 三,对于流式检测最初的一步就是选择何种方法,通常是何种荧光物 质标记的抗体。厂家根据需要开发了各种荧光标记的抗体,进行选择时首先要满足的就是所选择的抗体必...