第三章病毒感染的诊断与防治第三章病毒感染的诊断与防治吉林大学基础医学院吉林大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学教研室常用的病毒学诊断方法包括：病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测第一节病毒感染的诊断一、标本的采取与送检一、标本的采取与送检应注意下列原则：应注意下列原则：1.1.对本身带有杂菌对本身带有杂菌((如咽拭子、粪便如咽拭子、粪便))或或易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，易受污染的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素。应使用抗生素。2.2.因病毒在室温中易失去活性，标本应低温因病毒在室温中易失去活性，标本应低温保存并尽快送检。保存并尽快送检。3.3.血清学诊断标本的采取应在发病初期和病血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后后22～～3w3w内各取内各取11份血清，以便对比份血清，以便对比双份血清抗体效价的动态变化。双份血清抗体效价的动态变化。二、病毒的分离与鉴定(一)病毒的分离1.动物接种是最原始的病毒培养方法，根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，如嗜神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。2.鸡胚培养鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本接种于鸡胚的不同部位，最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。3.组织培养法(tissueculture)或细胞培养(cellculture)法是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。1.细胞的变化①有些病毒在细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应(CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。②有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。③有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。病毒在培养细胞中增殖的指标病毒培养时出现的CPE2.2.红细胞吸附红细胞吸附(hemadsorption,HAd)(hemadsorption,HAd)流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA)(haemagglutinin,HA)，，具有吸附脊椎动物具有吸附脊椎动物((豚鼠、鸡、猴等豚鼠、鸡、猴等))红细红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有测定具有HAHA的粘病毒与副粘病毒的增殖。的粘病毒与副粘病毒的增殖。若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的HAHA，，HAdHAd不再发生，称红细胞吸附抑制试验。不再发生，称红细胞吸附抑制试验。3.3.干扰现象干扰现象(interference)(interference)某些病毒感染细胞时不出现某些病毒感染细胞时不出现CPECPE或或其他易于测出的变化其他易于测出的变化((如如HAd)HAd)，但能，但能干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如干扰在其后感染的另一病毒的增殖。如风疹病毒感染风疹病毒感染VeroVero细胞时细胞时CPECPE不明显，不明显，但它能干扰后感染的埃可病毒但它能干扰后感染的埃可病毒(ECHOV)(ECHOV)的增殖，从而阻抑后者所特的增殖，从而阻抑后者所特有的有的CPECPE。。4.4.细胞代谢的改变细胞代谢的改变病毒感染细胞的结果可使培养液的病毒感染细胞的结果可使培养液的pHpH值改变，说明细胞的代谢在病毒感值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。改变也可作为判断病毒增殖的指标。((二二))病毒的数量与感染性测定病毒的数量与感染性测定1.1.蚀斑测定蚀斑测定是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单培养中有限扩散。结果是每一个有...
