第一节 酶的制备及活力测定一、酶的存在及提取1．酶是在生物体活细胞中合成的。其参与反应部位可以在细胞内，也可以在细胞外。2．在酶的提取过程中，温度、酸碱性等多种环境条件都可能影响酶的空间结构，导致酶变性，甚至丧失活力。因而提取出的酶首先需要检测酶的活力。3．酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间内产物的生成量来表示。在测定单位时间内麦芽糖的生成量来检测淀粉酶的活力的实验中，测麦芽糖的产量可用分光光度法。二、酶活力的测定方法和原理1．提取酶液：研磨水稻种子时需加石英砂，目的是充分研磨。制取匀浆并离心后，取上清液，其中一份要在水浴中加热，目的是使酶失活。2．滴加酶液。3．恒温处理。4．钝化处理：酶促反应进行一段时间后要向反应液中加物质的量浓度为0.4 mol/L 的NaOH 溶液，目的是钝化酶的活性，使反应终止。5．测定吸光值：测定吸光值时要把反应液与 2_mL3,5—二硝基水杨酸试剂混匀，并沸水浴 5 min，才能产生麦芽糖产物。然后分别移入四支比色杯，用分光光度计在波长520 nm处进行比色。6．绘制标准曲线。预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题 1问题 2问题 3问题 41一、植物淀粉酶活力的测定原理：淀粉酶将淀粉水解成麦芽糖。在 NaOH 和丙三醇存在下，3,5二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的 NaOH 碱性溶液中此化合物呈橘红色，在520 nm 波长处有最大吸收峰，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。如果在反应系统中加入适当过量的过氧化氢溶液，经酶促反应后，在酸性条件下，用标准高锰酸钾溶液滴定多余的 H2O2，反应如下：5H2O2＋2KMnO4＋4H2SO4―→5O2＋2KHSO4＋8H2O＋2MnSO4根据消耗的 H2O2的量计算出过氧化氢酶的活力。酶活力用每克鲜重样品 1 min 内分解 H2O2的毫克数表示。过氧化氢酶活力＝(A－B)×(VT/VS)×1.7/W×t2式中：A 为对照 KMnO4滴定毫升数(mL)；B 为酶反应后 KMnO4滴定毫升数(mL)；VT为提取酶液总量(mL)，VS 为反应时所用酶液量(mL)，W 为样品鲜重(g)；t 为反应时间(min)；1.7为换算系数，即每消耗 1 mL 物质的量浓度为 0.1 mol/L 的高锰酸钾溶液，相当于样品中含有 1.7 mgH2O2。用分光光度法也可测定过氧化氢酶的活力。在有过氧化氢存在时，H2O2将愈创木酚氧化生成茶褐色物质，后者在波长为470 nm 处有最大吸收峰，再用721 ...
