免疫学技术免疫学技术免疫球蛋白的鉴定免疫球蛋白免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)是一组具有抗体活性的蛋白质，由浆细胞产生，主要存在于生物体血液和其他体液（包括组织液和外分泌液）中，约占血浆蛋白总量的20％；亦可分布在B细胞表面。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。Ig是体液免疫应答中发挥免疫功能最主要的免疫分子，免疫球蛋白所具有的功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。高度特异性体外抗原抗体反应的特点可逆性Ag+Ab←→AgAb[AgAb]Ab结合部位affinity亲和力K=—————Ag决定簇[Ag][Ab]体外抗原抗体反应的影响因素电解质：生理盐水/PBSpH：6-8温度：37-42℃合适比例：1934年，Marrack网格学说（latticetheory）常用的检测方法经典的抗原抗体反应凝集反应沉淀反应补体参与的反应中和反应凝集反应agglutination直接凝集反应间接凝集反应间接凝集抑制反应Coomb’s试验直接凝集反应1%血球抗A抗B沉淀反应precipitationreaction絮状沉淀试验环状沉淀试验凝胶内沉淀试验扩散试验电泳技术免疫沉淀反应是利用可溶性抗原（如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等）和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环（抗原-抗体复合物）。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶，根据试验的要求用生理盐水或缓冲液配制，有的加电流,使反应更快更灵敏。免疫沉淀反应琼脂糖的疏散网状结构有利于大分子的自由迁移；合适比例的抗原抗体结合后聚集形成沉淀；沉淀的产生阻止抗原抗体复合物的自由运动；沉淀带形成一种特异性的半渗透性屏障，阻滞相同抗原抗体复合物，而允许不同的分子通过。沉淀线的特征与位置：1抗原、抗体的特异性和浓度，2抗原、抗体分子的大小3扩散率当抗原抗体存在多种成分时，将呈现多条沉淀线以至交叉反应线，可用来检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度比较抗原之间的异同点。根据抗原与抗体反应的方式和特性，免疫沉淀试验可分为单向扩散试验和双向扩散试验。单向扩散试验(singlediffusiontest)是在琼脂凝胶中混入一定量的抗体，使待测的抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散，在一定区域内形成可见的沉淀环。双向扩散试验(doublediffusiontest)是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散，在比例恰当之处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体进行定性分析。单向扩散试验试管法该方法由Oudin于1946年报道，将混有抗体的琼脂凝胶注入小口径试管内，待其凝固后在上层加上抗原溶液，让抗原自由扩散人凝胶内，在抗原与抗体比例适当位置形成沉淀环。本法多用于排泄物和组织匀浆中的细菌、寄生虫、螺旋体等抗原的检测。但此法的沉淀环不易观察及定量，目前较少应用。平板法此法由Mancini于1965年提出，将抗体或抗血清混入加热融化的0.9%琼脂糖内(50℃)，未凝固前倾注成平板，待凝固后在琼脂板上打孔(一般直径为3-5mm)，孔中加入抗原溶液，平板平放于湿盒中置37℃让其向四周扩散，24-48h后观察孔周围出现的沉淀环。由于试验中抗原向四周扩散，故又称为单向辐射状免疫扩散(singleradialimmunodiffusion，SRID)，最后测量沉淀环的直径或计算环的面积。沉淀环的直径或面积的大小与抗原量呈正相关，同时这种沉淀环还与分子量和扩散时间有关。单向扩散示意图抗原量与沉淀环直径的关系有两种计算方法：1.Mancini曲线适用于大分子抗原和长时间扩散(>48h)的结果处理，在一定范围内，沉淀环随时间延长而逐渐扩大，当抗原抗体反应充分而终止时，沉淀环直径的平方(d2)与抗原浓度(C)呈线性关系，常数K=C/d2，此为Mancini曲线。使用普通坐标纸画曲线。2.Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间(24h)扩散的结果处理。抗原浓度的对数(logC)与沉淀环直径(d)呈线性关系，常数K=logC/d，此为Fahey曲线。使用半对数坐标纸画曲线。采用平板...
