1肿瘤放射治疗学备课笔记（讲稿）内容教师班级时间2第六章临床放射生物学研究的主要方法第一节细胞存活的测定方法一、辐射所致细胞死亡的定义几百戈瑞的大剂量照射之后，所有细胞机能都中止，最终发生细胞溶解，这种情况被认为是细胞即刻死亡或间期死亡；用较低的几个戈瑞照射正在分裂或还能进行分裂的细胞（如骨髓细胞系、皮肤或小肠隐窝），此时部分细胞丧失其分裂或增殖能力。细胞死亡定义为细胞不可逆的丧失增殖能力，即在下一次或以后的有丝分裂时发生增殖性死亡。因此，子代细胞形态完整而不能发育的受损细胞也许依然能合成蛋白质或 DNA,并可能通过一次或几次有丝分裂，然而只要这种细胞失去无限分裂能力则其后代肯定死亡，那么按上述定义都应认为该细胞已死亡。另一方面，存活细胞或能够生存发育的细胞是指保持细胞增殖能力，并能够因此而形成集落或克隆的细胞，这些细胞称为克隆源性细胞。在体内，肿瘤和正常组织只有一小部分细胞属于克隆源性细胞，受照后期数量迅速减少。上述细胞死亡定义对放射治疗具有特殊意义，因为肿瘤细胞即使全都依然存在，但失去了无限增殖能力，并因此而失去了局部浸润或远地转移的能力，这样也就达到局部控制的目的。同样，对于正常组织，大多数急性和慢性放射效应都发生在丧失生存发育能力的情况下。因此，必须指出的是在药物离体实验中用得较多的 MTT 细胞存活测定方法，也曾试图用于检测细胞的放射效应,但终因 MTT 法反映的细胞“死亡”，不是辐射所致的“细胞增殖性死亡”，从而未能被放射生物学所接受。二、离体细胞存活实验1．细胞存活率以不同剂量照射培养瓶内的群体细胞后，将这些细胞制成单细胞悬液种植到平皿内，或将不同类型的单细胞先种植到平皿内再照射。照射后，根据不同细胞系的生长速度，培养一定时间后可见到下列几种现象：⑴ 一些细胞依然以单细胞形式存在，不分裂；（2）—些细胞可以完成一次或两次分裂，形成很小的、发育不全的集落（克隆）。这些克隆内的细胞数均达不到50 个；⑶ 一些细胞仍能生长成大集落，尽管这些集落体积大小不一，但与未照射的对照集落没什么差别。这些克隆反映了照射后在平皿内仍能分裂的细胞，即能保留无限增殖能力的存活细胞。计数这些仍保持着无限增殖能力的克隆比例数，就可以算出各个照射剂量点的细胞存活率（survivalfraction,SF）。SF-某一剂量照射实验组的克隆数/（该组细胞种植数 XPE）PE 为未照射细胞克隆形成率，PE=（未照射细胞克隆形成数/细...
