重庆医药高等专科学校项目9氯化钠注射液的无菌检查法无菌检查法的定义:无菌检查法是指用于检查《药典》要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。符合规定的意义:仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。（一）实训目的（二）原理及应用（三）仪器与试剂（四）操作步骤（五）实训报告（六）注意事项（七）思考与讨论（一）实训目的1．掌握注射剂（薄膜过滤法）的操作方法。2．熟悉无菌检查（薄膜过滤法）的原理。1.试验原理：无菌检查法是利用无菌操作的方法，将被检查的药品分别加入适合需氧菌、厌氧菌和真菌生长的液体培养基中，置于适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断药品是否合格。（二）原理及应用2.操作流程及方法：培养基的制备、培养基的适用性检查、稀释液和冲洗液的制备、方法验证试验、取样、供试品无菌检查。供试品无菌检查的方法有薄膜过滤法和直接接种法两种。只要供试品性状允许，应优先采用封闭式薄膜过滤法，也可用一般薄膜过滤器。哪些药物需要进行无菌检查？思考：常见的无菌制剂（检验品种）包括哪些?3.应用注射剂（水针、粉针、油乳注射剂）眼用及非注射产品（手术、烧伤、严重创伤面给药制剂）可吸收的止血剂无菌封装的原料药医疗器具和医用材料常见的无菌制剂（检验品种）：4.无菌检查的环境要求环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域一般要求温度：18～26℃湿度：45％～65％例行消毒处理洁净度检查1.菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC(B)26003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕生孢梭菌（Clostridiumsporogenes）〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC(F)98001〕黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC(F)98003〕均为国家药品检定机构分发的标准菌种（三）仪器与试剂2.培养基一般采用商品脱水培养基、洁净玻璃器皿、纯水配制培养基的pH应符合规定分装好的培养基及时密封后必须在配制当天（2小时内最佳）进行灭菌处理培养基的储存:2～25℃、避光环境，可保存3周左右培养基装量符合规定要求培养基适应性检查（无菌性检查、灵敏度检查）需氧菌和厌氧菌培养基：硫乙醇酸盐流体培养基30～35℃（32℃左右）红色氧化层（h＜深度的1/5）100℃水浴加热10分钟以除去氧化层，加热时间不超过20分钟。真菌培养基：改良马丁培养基23～28℃（25℃左右）沸水浴加热10min灭菌后放置3天的培养基3.供试品氯化钠注射液（250ml）4.稀释液及冲洗液稀释液：0.1%蛋白胨水溶液（PH7.1）（如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤）或pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。冲洗液：聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液（非水溶液制剂供试品的冲洗）溶剂：十四烷酸异丙酯（膏剂和粘性油剂的溶剂，膜滤除菌）5.仪器及用具无菌室内常备器具恒温培养箱及生化培养箱离心机，显微镜，高压蒸汽灭菌器，恒温烤箱，开放或全封闭过滤系统等玻璃器皿无菌衣，裤，帽，口罩除菌滤器及滤膜薄膜过滤仪24/10/24171.培养基的适用性检查无菌性检查：每批培养基随机抽取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。灵敏度检查：用已知的标准菌种来检定培养基的敏感度，检定培养基敏感度的菌种是由国家药品检定机构分发的标准菌种。（四）操作步骤24/10/2418生孢梭菌菌液：接种至硫乙醇酸盐流体培养基；30～35℃培养18～24小时。白色念珠菌菌液：接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基；23～28℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%NaCl无菌溶液配制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。（1）菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液：接种至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基；30～35℃培养18～24小时。培养基灵敏度检查方法：24/10/2419黑曲霉菌菌液：接种至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养5～7天至产生大量孢子，加入3～5ml无菌的含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用无菌的含0.05％...
