植物表达载体构建与遗传分析VIP免费

第七章植物表达载体构建与第七章植物表达载体构建与遗传转化遗传转化植物基因工程植物基因工程植物基因工程以植物为对象，植物基因工程以植物为对象，将从不同生物中分离到的基因，经酶将从不同生物中分离到的基因，经酶切连接构成重组切连接构成重组DNADNA分子，然后转入分子，然后转入受体植物细胞使新基因在受体细胞内受体植物细胞使新基因在受体细胞内整合、表达，获得新的植物类型，再整合、表达，获得新的植物类型，再生植株通过无性或有性增殖将外源基生植株通过无性或有性增殖将外源基因遗传给后代。因遗传给后代。植物基因工程的作用与意义植物基因工程的作用与意义植物基因工程能顺利地在不同植物基因工程能顺利地在不同物种间进行基因转移，因此育种学家可物种间进行基因转移，因此育种学家可根据意愿改造植物的一些性状，在较短根据意愿改造植物的一些性状，在较短时间内使获得高产、优质、抗逆性强的时间内使获得高产、优质、抗逆性强的作物新品种成为现实作物新品种成为现实。。植物基因工程主要研究内容植物基因工程主要研究内容1)1)目的基因的克隆与分离；目的基因的克隆与分离；2)2)植物表达载体构建；植物表达载体构建；3)3)建立适宜的遗传转化再生体系；建立适宜的遗传转化再生体系；4)4)遗传化即转基因；遗传化即转基因；5)5)转化细胞或植物的筛选；转化细胞或植物的筛选；6)6)转化植株检测；转化植株检测；7)7)转基因植物环境释放的安全评价。转基因植物环境释放的安全评价。一、植物表达载体构建一、植物表达载体构建构建植物表达载体的目的构建植物表达载体的目的构建植物表达载体的主要目构建植物表达载体的主要目的是将目的基因进行修饰改造，使其的是将目的基因进行修饰改造，使其转入受体植物后的表达符合目的需要。转入受体植物后的表达符合目的需要。分离获得的目的基因往往不具有分离获得的目的基因往往不具有完整的基因结构，而只是表达产物的完整的基因结构，而只是表达产物的可读框（可读框（ORFORF：：openreadingFramopenreadingFramee）；还需加上启动子和终止子。）；还需加上启动子和终止子。如果分离到的目的基因拥有完整如果分离到的目的基因拥有完整的基因结构（即拥有启动子、表达产的基因结构（即拥有启动子、表达产物的开放阅读框和终止子），因基因物的开放阅读框和终止子），因基因的表达特点不符合要求也需进行修饰的表达特点不符合要求也需进行修饰改造；有些基因例外，如改造；有些基因例外，如CC44光合代谢光合代谢途径的一些关键酶基因只能用原基因途径的一些关键酶基因只能用原基因的所有完整结构才有可能达到目的的所有完整结构才有可能达到目的。。启动子（启动子（promoterpromoter））启动子启动子是位于基因的是位于基因的5’5’端外测，端外测，紧挨转录起始位点一段非编码的核苷紧挨转录起始位点一段非编码的核苷酸序列，它的功能是引导酸序列，它的功能是引导RNARNA聚合酶聚合酶同基因的正确部位相结合；同基因的正确部位相结合；终止子（终止子（terminatorterminator））终止子是在基因终止子是在基因3’3’端下游外测端下游外测与终止密码相邻的一段核苷酸序列，与终止密码相邻的一段核苷酸序列，具有转录终止信号的功能。具有转录终止信号的功能。一）影响构建植物表达载体的一）影响构建植物表达载体的主要因素主要因素1)1)目的基因的结构特点；目的基因的结构特点；2)2)转化受体植物类型与种类；转化受体植物类型与种类；3)3)转化方法；转化方法；4)4)转入受体植物的表达要求；转入受体植物的表达要求；5)5)植物表达载体类型；植物表达载体类型；6)6)选择适宜的启动子与终止子；选择适宜的启动子与终止子；7)7)选择性标记基因及报告基因；选择性标记基因及报告基因；((二）构建植物表达载体的一二）构建植物表达载体的一些基本知识与实验技能些基本知识与实验技能从事植物表达载体构建工作主从事植物表达载体构建工作主要是进行各种质粒的提取、纯化、酶要是进行各种质粒的提取、纯化、酶切、相关切、相关DNADNA片段的回收、连接、转片段的回收、连接、转化与验证等，需要一些分子生物学相化与验证等，需要一些...