肿瘤精准靶向治疗2.肿瘤个体化治疗发展趋势1.肿瘤个体化治疗循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞肿瘤分子诊断肿瘤分子诊断临床上治疗肿瘤的方法•患者对药物是否敏感？毒性是否可耐受？•患者治疗后转移复发风险有多高？个体化治疗：医学概念。应用它不仅降低并发症的发生,还降低医疗费用。肿瘤标准化治疗Ⅰ期患者：手术/化疗Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向肿瘤个体化治疗标本→基因检测→遗传特性→选择化疗/靶向药物病理分型分子分型已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7检测方法：RT-PCR,FISH,PCR-测序等EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染色体的p21和p23带克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因靶向EGFR的抗肿瘤药物类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR－TKI)作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性，阻断EGFR信号通路；药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替尼（罗氏）。类别二：单克隆抗体(mAb)作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与EGFR的结合；药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗氏）。基因EGFR热点突变位点•EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21•耐药突变：T790M靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药之前须检测K-ras基因突变检测；K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用；中国人群中K-ras基因突变率15%！15%的病人不应该使用爱必妥！野生型突变型WorldJGastroenterol.2011November21;17(43):4779-4786.基因KRAS热点突变位点10KRAS主要突变在：外显子2（密码子12，13），3（密码子61）个体化检测平台基因突变检测——ARMS技术，测序等ARMS技术——普通PCR等位基因特异性扩增法（AlleleSpecificAmplification，ASA）建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统（AmplificationRefractoryMutationSystem，ARMS）、等位基因特异性PCR（AlleleSpecificPCR，ASPCR）等。方法：2条正向引物（针对正常DNA，突变DNA）1条反向引物2个平行的PCR反应普通PCR仪应用：对微量突变进行检测。TaqMan-ARMS技术TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。一个PCR体系中：1对引物，1条探针每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！一个PCR体系中：1对引物，1条探针每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！SNP位点检测应用EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较测序技术发展历程SangerSequencing（1977）IonSemiconductorSequencing（2011）Next-GenSequencing（2005以后）IonTorrent半导体测序原理IonTorrent半导体测序平台及芯片PI芯片：sequenceexomesandwholetranscriptomes（5Gb）目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测基因表达量（mRNA）检测——指导个体化化疗可使标准化疗方案得到个体化应用mRNA检测主要技术特色•采用荧光定量PCR技术，采用内参比RNA作为质控对照，应用beta-actin作为内对照，定量检测检测目的基因mRNA表达水平。•适用于各种肿瘤组织检测，包括石蜡标本、穿刺标本、冰冻活检标本等。•国内采用校准RNA（CalibratorRNA）方法进行基因表达定量。23基础：>5000例样本人种：中国患者样本标准：正态分布定位：精确到1%统计：p<0.05Q-PCR检测基因表达数据库NCCN2012年版临床治疗指南明确指出：患者接受吉西他滨化疗前进行RRM1mRNA检测可提高治疗有效率和患者生存率。RRM1mRNANo.PatientsMedianSurvivalP<1.4815.5mos0.0028>1.486.8mosRRM1表达与吉西他滨疗效相关的临床数据ERCC1表达与铂类药物疗效相关的临床数据ERCC1低表达患者，能从铂类辅助化疗中获益.BRCA1/2表达与铂类药物疗效相关的临床数据BRCA1过度表达•铂类耐药的预测因子•抗微管类药物的敏感因子28•低TSmRNA水平的肿瘤患者接受氟类化疗的效果较好，中位生存期较长。•TS低表达的患者对培美曲赛的疗效好。TS高表达影响氟类和培美曲塞药效ShirotaYetal.JClinOncol.2001;19:4298-304...
