生物化学与分子生物学实验技术(扫描)

一 血糖定量测定(GOD-PAP法) 原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖，正常情况下，其含量较恒定。健康家兔的血糖水平为 80~ 120 mg／dL。(dL 代表 100 mL。) GOD-PAP 法，即氧化酶-过氧化物酶法是近几年临床血糖定量测定普遍采用的方法。该法测定血糖依据的酶反应为： 醌亚胺在 A480nm~ A550nm 波长有最大吸收，所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。在同样条件下，测定葡萄糖标准液和样品的光吸收值，即可求出样品中葡萄糖的含量。 试剂和材料 （1）血糖试剂盒：北京中生生物工程高技术公司产品，含有：葡萄糖氧化酶(GOD)>13 U／mL；过氧化物酶(POD)>0.9 U／mL；磷酸缓冲液：磷酸盐 11 mmol／L，酚 100 mmol ／L pH7.0；4 一氨基安替比林 0.77 mmol／L；葡萄糖标准液：100 mL／dL。使用时，将 90 mL 磷酸缓冲液与 10 mL 酶制剂混匀制成的溶液为工作液。每一试剂盒装有 2 瓶磷酸缓冲液和 2 瓶酶制剂。 （2）样品：(兔血清) 操作 取3 支试管，按下表加入试剂。 分别将各试管内容物摇匀，37℃保温 10~ 15 min(避免阳光直射)。用光程为1.0 crn 的比色杯，在 A480~ A550 波长进行比色。将测得的 A标准、A样品数据代入下述公式，计算出样品中葡萄糖的浓度。 式中 C：样品中葡萄糖的浓度；A标准为葡萄糖标准液在A480~A550 波长的光吸收值；A样品：待测样品在A480~A550 波长的光吸收值；C标准为葡萄糖标准液中葡萄糖的浓度。 注意事项 （1）试剂中含迭氮铵做为稳定剂，勿与皮肤、黏膜接触。 （2）制备样品时，血清应在收集血样后1 h 内与细胞分离。加糖原酵解抑制剂(NaF，KF)后，15~25℃可贮存 24 h，4℃在密闭的容器中可贮存 7 d。 二 蒽酮比色定糖法 原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm 处有最大吸收。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存在含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于以上特定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。 试剂 （1）蒽酮试剂：取 0.2 g 蒽酮溶于 100 mL 80％(V／V)硫酸中，当日配制使用；（2）标准葡萄糖溶液(0.1 mg／mL)：100 mg 葡萄糖用蒸馏水定容至 1 L(可滴加几滴甲苯作防腐剂)；（3）标准糖原溶液(0.1 mg／mL)：100 mg 糖原用蒸馏水定容至 1 L(...