出血性疾病的实验室检测VIP免费

出血性疾病的实验室诊断止血过程BVInjuryPlateletActivationPlt-FusionBloodVesselConstrictionCoagulationActivationStableHemostaticPlugThromibn,FibrinReducedBloodflowTissueFactorPrimaryhemostaticplugNeural出血性疾病的诊断流程凝血途径Fg，TT血友病筛选及诊断试验•PT•APTT•TT•Fg筛选试验混合试验凝血因子活性检测病理性抗凝物质检测FVIII抑制物类肝素狼疮抗凝物质纠正不纠正确诊试验混合试验(mixingtest)•PT延长＞3′，APTT延长＞5′•患者血浆：正常人血浆1：1或4：1•即刻检测，37°C孵育2h后检测•结果判断：＞X+2SD不纠正Mixingtest结果判断因子缺陷•APTT参考范围26-34s•APTT60s•APTT1:1mix32s•APTT被纠正•因子缺陷抑制物•APTT参考范围26-34s•APTT60s•APTT1:1mix40s•APTT不被纠正•抑制物存在Mixingtest结果解释aPTTresultsExample123A--normalplasma30”30”30”B--testplasma90”90”90”C--test+normal(incubated)35”70”70”D--test+normal(non-incubated)35”48”70”Example1–因子缺乏Example2–FVIII抑制物Example3–即刻反应抑制物凝血因子缺陷症检测•活性测定凝固点法一步法（One-Stage）---临床测定参比方法两步法（Two-Stage）发色底物法（ChromogenicFactorVIIIAssay）•抗原测定ELISA凝血因子活性和抗原检测一步法检测FVIII:C(One-Stage)原理：•基于APTT凝固法•乏FVIII血浆倍比稀释参比血浆和待检血浆•APTT时间与FVIII:C对数成线性关系•制备标准曲线FVIII:C检测一步法检测FVIII:C(One-Stage)质量控制•标准曲线和待检标本分析前准备条件必须在相同•标准曲线检测FVIII:C范围尽可能宽•稀释倍数:标准曲线至少3个稀释度待检标本至少2个稀释倍数ResponseLogDoseOne-StageFactorVIIIBioassayClottingTimeFactorVIIIConcentration(Log)TS100%25%One-StageFactorVIIIBioassayFactorVIIIConcentration(Log)ClottingTimeTS100%50%非平行，交于一点抑制物存在One-StageFactorVIIIBioassayFactorVIIIConcentration(Log)ClottingTimeTS100%50%非平行标本已被激活或技术错误One-stageFactorVIIIAssay试剂因素：–磷脂–激活剂–乏FVIII血浆•血友病A血浆•免疫吸附制备•VWF含量正常因子缺陷敏感的APTT试剂发色底物测定原理发色底物测定原理•直接一步测定•FXa+SubstratePeptide+pNa(measured405nm)•直接两步测定(ChromogenicFVIII)•FX+FIXa/Ca2/PL+FVIIIaFXa+SubstratePeptide+pNa•间接测定(ATactivityassay)•（ATHeparin）+IIaresidualIIa+SubstratePeptide+pNa发色底物法分类AT活性测定发色底物法测定FVIII:C•商品化试剂盒•两步法的原理•SSCISTH推荐为高纯度FVIII:C测定参比方法•凝固法和发色底物法哪个更优越？抑制物检测方法•Bethesda法•Nijmegenmodification狼疮抗凝物质检测相关概念aCL抗心磷脂抗体ELISA法检测抗心磷脂的抗体抗体依赖或不依赖β2GP1aPL抗磷脂抗体IgG，IgM或IgA抗体，靶蛋白是心磷脂、β2GP1或凝血酶原，靶蛋白与磷脂结合β2GP1Β2-糖蛋白1抗心磷脂抗体与心磷脂结合的桥梁蛋白LA狼疮抗凝物质功能检测，抗β2GP1或凝血酶原抗体，使凝血时间延长•矛盾体内与血栓相关体外具有抗凝活性•抗体抑制蛋白磷脂复合物β2GP1-FXI-血小板膜磷脂复合物凝血酶原-FXa-FVa-血小板膜磷脂复合物•干扰磷脂依赖的凝血反应：APTT、PT及dRVVT狼疮抗凝物质（LA)狼疮抗凝物质(LA)•与抗心磷脂抗体阳性相比，狼疮抗凝物质阳性与血栓、流产、SLE血栓具有更好的相关性•β2GP1是血栓发生的独立的危险因素•抗磷脂抗体综合征分类：抗磷脂抗体•临床疑似APS•APTT延长•混合试验证实有抑制物存在•排除肝素导致的APTT延长TTRT狼疮抗凝物质(LA)检测检测方法•ELISA法检测：抗心磷脂抗体抗磷脂抗体β2GPI抗凝血酶原抗体•功能测定-凝固为基础的检测用狼疮抗凝物质检测β2GPI-磷脂和/或凝血酶原-磷脂复合物基于PT、APTT、dRVVT的测定dRVVT试剂：RVV、稀释的磷脂、肝素中和剂筛选试验：低浓度磷脂确诊试验：高浓度磷脂dRVVT结果分析血管性血友病（VWD）VWD诊断•FVIII:C•VWF:Ag•VWF:RCo•BT•PFA-100®•VWF多聚体检测•胶原结...