AKTA纯化系统操作

AKTA 蛋白纯化系统操作 AKTA 蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA 系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER 等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER 为例简单介绍 AKTA 蛋白纯化系统的一般操作。 1、认识 AKTA。 AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。它们是： FIG 1、AKTA EXPLORER 主机 • Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。在 AKTAexplorer 100，流速范围 0.01-100 ml/min，压力高达 10 Mpa（泵名为P-901）。在 AKTA explore10，流速范围 0.001-10 ml/min，压力高达 25 Mpa（泵名为P-903）。 • Monitor UV-900，同时监控 190－700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。（针对部分AKTA PURIFIER 机型，尚有 UPC-900 监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。） • Monitor pH/C-900，在线电导和 pH 监测的组合监测器。 Fig 2、AKTA EXPLORER 硬件模式图 AKTA EXPLORER 系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。打开装阀的门可全部看到。柱被挂在装阀的门的外侧。 分离装置由 UNICORN 软件控制。软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置 CU950 进行控制。 2、一般操作 2.1 开机 按位于底部平台前左侧的 ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950 上面的 3 个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上 UNICORN 图标，进入操作界面。UNICORN 的操作界面分为四个窗口（Fig 3） Fig 3、Unicorn 的操作界面 2.2 准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过 0.45µm 的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。 2.3 清洗及管道准备 首先将A 泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中，将B 泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中，在 system control 窗口点击工具栏内的 manual，选择 pump→pump wash explorer，选中 A1,B1 管道为 ON， execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4)...