Bactobac表达系统中文版说明书

Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 试剂盒内容物： Introduction： Overview ： Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统提供快速有效的方法产生重组杆状病毒。此方法基于让已经转入杆状病的质粒（杆粒）的位点特意转座子的表达框的质粒在Ecoli 中扩增。Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统主要包括： *pFastBac 捐献质粒的选择，它要能够产生包含目的位点的表达结构，这个目的基因的产生被杆状病毒特意位点启动子控制。 *一个Ecoli 宿主，DH10Bac，包含杆状病毒质粒（杆粒）和辅助质粒，在转染pFastBac 表达结构后可以产生重组杆粒。 *一个控制表达的质粒，包括Gu s 和/或CAT 基因，以便在感染细胞后产生重组杆状病毒，表达β-葡萄糖酸酐酶和/或氯霉素乙酰转移酶。 Bac-to-Bac 表达系统的优点： 使用这个系统产生重组杆状病毒较传统的同源重组有以下优点： *与使用同源重组产生重组杆状病毒所需的4-6 周相比，鉴别纯化重组病毒少于两周 *减少了从斑点筛选重组病毒DNA 所包含亲缘和非重组病毒的几率 *可以快速同时进行大量重组，适合表达功能性研究的蛋白 选择pFastBac 菌体（Vector）： 大量的pFastBac 菌体都适于进行 Bac-to-Bac 表达系统。选择对于你的需要最合适的菌体。 Vector 特点 参考 pFastBacTM1 高水平表达的强 AcMNPV 聚乙烯（PH）启动子 用于简单克隆的大量克隆位点 Anderon 1996 pFastBacTMHT 高水平表达的聚乙烯启动子； N-末端含有6XHis，可以用来纯化重组蛋白，并可用 TEV蛋白酶切去； 提供3 个阅读框 Polay es 1996 pFastBacTMDual 两个强启动子（PH 和p10）可以同时表达两种蛋白； 两个大的克隆位点 Harris 和Polaye 1997 指南用途： 指南提供了一个对于Bac-to-Bac 表达系统的概述，并对以下提供指导： 1、 克隆目的基因到 pFastBacTM 供体质粒的选择 2、 转化 pFastBacTM 结构到最高效的DH10BacTM 产生重组质粒 3、 转染重组质粒 DNA 到昆虫细胞产生重组杆状病毒 4、 扩增滴定（Amplify and titer）杆状病毒株，使用病毒株感染昆虫细胞表达目的重组蛋白 重要的：Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统是用来帮助你产生重组杆状病毒，在昆虫细胞中进行高水平表达目的基因的系统。虽然他可以帮助你很容易的产生杆状病毒表达你的重组蛋白，但是使用这系统更倾向于有杆状病毒生物学和昆虫表达背景的使用者。我们高度推荐使用者具有病毒和组织培养的技术和知识。 Bac-to-Bac 表...